[發明專利]OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用

有效

• 申請號: 202010149535.0
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111172174B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 李豐成;唐乙鈞;劉思彤;黨正君;阮楠;吳曉楓
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用，其特征在于，所述OsUGE3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述性狀為株高、生物量、分蘗數以及抗倒伏能力，所述應用為利用所述OsUGE3基因構建超表達水稻植株。

2.根據權利要求1所述OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用，其特征在于，利用所述OsUGE3基因構建超表達水稻植株，包括如下步驟：

用BamHI和XbaI對水稻OsUGE3基因全長CDS序列以及超表達載體pCAMBIA1300s雙酶切后，得到酶切后的載體和目的基因片段，通過T4 DNA連接酶連接酶切后的載體和目的基因片段，將連接產物轉化至大腸桿菌感受態，確定構建正確的超表達載體，通過農桿菌介導法轉染至待轉化水稻品系，經選擇、分化、生根、煉苗、移栽，獲得轉基因水稻植株。

3.根據權利要求2所述OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用，其特征在于，具體包括如下步驟：

S1，提取水稻mRNA并反轉錄合成cDNA；

S2，以合成的cDNA為模板，利用特異性引物進行擴增，獲得OsUGE3基因全長CDS序列，所述引物序列如下：

正向引物：5’-TTTGGATCCATGGTGAGCGGCGGAGGAGT-3’；

反向引物：5’-AAATCTAGACTAATTCTGCTCAGCATTGG-3’；

S3，用BamH I和XbaI分別對超表達載體pCAMBIA1300s和上述獲得的OsUGE3基因的CDS序列片段進行雙酶切，酶切后的載體和目的基因片段分別回收，將回收的載體片段和目的基因片段按摩爾濃度比1：3進行混合，在T4 DNA連接酶作用下進行連接，于16℃條件下連接3小時，將構建的連接產物轉化大腸桿菌感受態，提取轉化后的大腸桿菌質粒進行BamH I和XbaI雙酶切鑒定，酶切后獲得目的片段大小的載體為構建正確的超表達載體；

S4，將上述構建正確的超表達載體轉化農桿菌感受態，提取轉化后的農桿菌質粒，將其再次轉化大腸桿菌感受態，并提取大腸桿菌質粒進行酶切檢測，確定構建正確的超表達載體轉入農桿菌中，獲得重組農桿菌；

S5，將S4獲得的重組農桿菌轉染至水稻品系，經選擇培養、分化培養、生根培養、煉苗、移栽，獲得超表達水稻植株。

4.根據權利要求3所述的OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用，其特征在于，S2中，PCR反應擴增體系為：

模板cDNA 5μl；2×KOD buffer 25μl；dNTP 4μl；正向引物1.5μl；反向引物1.5μl；KOD2μl；ddH2O11μl。

5.根據權利要求4所述的OsUGE3基因在改善水稻性狀中的應用，其特征在于，PCR反應擴增程序為：

94℃預變性5min；94℃變性30s，53℃退火30s，72℃延伸2min，29次循環；72℃延伸5min。