[發明專利]一種微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株及其應用

有效

• 申請號: 202010147470.6
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111394277B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 陳曉明;程元榮;黃捷;陳夏琴;楊國新;金東偉;余輝
• 申請（專利權）人: 福建省微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/60;C12R1/125
• 代理公司: 福州市鼓樓區京華專利事務所(普通合伙) 35212
• 代理人: 林云嬌

1.一株微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株，其特征在于：為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）F9，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，保藏日期為2013年06月19日，保藏編號為CGMCC NO. 7764。

2.如權利要求1所述的一株微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株在制備雷帕霉素衍生物中的應用，其特征在于：所述雷帕霉素衍生物為43-β-D-吡喃葡萄糖-雷帕霉素。

3.根據權利要求2所述的一株微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株在制備雷帕霉素衍生物中的應用，其特征在于：包括以下步驟：

（1）菌株培養

將菌株接種于保藏培養基，保存備用；

（2）種子培養

將菌株轉接于種子培養基，28℃ 、220r／min振蕩培養15～18h；

（3）轉化培養

將菌株以3％的接種量接種于轉化培養基，28℃、220r／min振蕩培養24h時，加入轉化底物雷帕霉素至終濃度為250ug/mL后在相同條件下繼續培養48h，得到含雷帕霉素衍生物的轉化液；

所述種子培養基和轉化培養基，以g/100mL計：可溶性淀粉2.4，葡萄糖0.1，酵母浸出汁0.3，蛋白胨0.3，K₂HPO₄·3H₂0 0.1,MgSO₄·7H₂O 0．05，pH自然。

4.根據權利要求3所述的一株微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株在制備雷帕霉素衍生物中的應用，其特征在于：所述轉化底物雷帕霉素，母液為30mg／mL，以乙醇配制。

5.根據權利要求3所述的一株微生物轉化制備雷帕霉素衍生物的菌株在制備雷帕霉素衍生物中的應用，其特征在于：將所述轉化液用等體積的乙酸乙酯萃取2次，每次20min，合并萃取液，減壓濃縮至浸膏，浸膏進行HP20ss樹脂柱層析梯度洗脫，洗脫液為丙酮：水體積比=45：55-50：50，HPLC檢測，收集出峰組分減壓濃縮至浸膏，浸膏再進行硅膠柱梯度洗脫，采用的洗脫液為甲醇：二氯甲烷體積比=1:10- 1:5，HPLC跟蹤檢測，收集出峰組分減壓濃縮至干。