[發明專利]一種核酸跨膜運輸載體及其制備方法

有效

• 申請號: 202010147366.7
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111184691B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 劉佳;張立新;那日松;劉曉光;趙熹;馮獻禮;丁勝利
• 申請（專利權）人: 江蘇仁明生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/113
• 分類號: A61K9/113;A61K47/36;A61K47/28;A61K31/7088
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張志軍

1.一種核酸跨膜運輸載體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1）脂肪酸改性殼聚糖的制備：所述脂肪酸改性殼聚糖由殼聚糖與脂肪酸在酸性水溶液以及有機溶劑A組成的混合液中，活化劑以及縛酸劑的存在下反應得到；

2）核酸跨膜運輸載體的制備：所述的核酸跨膜運輸載體由脂肪酸改性殼聚糖、膽固醇以及待包封的核酸類物質，利用擠出法獲得；具體步驟為：

（1）將殼聚糖溶于乙酸溶液中，然后滴加溶有縛酸劑、活化劑和脂肪酸的有機溶劑A，攪拌反應3小時，有機相旋轉蒸發至干，洗滌、冷凍干燥至恒重，得到淡黃色脂肪酸改性殼聚糖；

（2）將步驟（1）得到的脂肪酸改性殼聚糖以及適量膽固醇溶于有機溶劑B，加入待包封的核酸類物質溶液，乳化得到W/O初乳，將W/O初乳加入到10倍體積的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，利用旋轉蒸發去除有機溶劑，利用擠出法制備得到核酸跨膜運輸載體；

所述步驟（1）中的殼聚糖分子量為10000-100000；

所述步驟（1）中的殼聚糖、脂肪酸、活化劑以及縛酸劑的摩爾比為：（0.1～1.0）:1.0:1.5:2.0；

所述步驟（2）中的脂肪酸改性殼聚糖、膽固醇以及核酸類物質的質量比為：（2.0～10.0）:（0.1～1.0）:1；

脂肪酸改性殼聚糖中氨基糖區域氨基的pka在6.5以下，能夠為核酸類物質提供親和性高的結合區域；

所述的核酸跨膜運輸載體由原料和負載藥物組成，所述原料包括脂肪酸改性殼聚糖和膽固醇，所述負載藥物為核酸類物質；所述脂肪酸改性殼聚糖由“糖酯區域”和“氨基糖區域”構成，

圖示如下：

。

2.根據權利要求1所述的核酸跨膜運輸載體的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中的有機溶劑A為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙酸甲酯中的一種。

3.根據權利要求1所述的核酸跨膜運輸載體的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中的脂肪酸為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、α-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸中的一種或幾種的混合物；所述活化劑為甲酰氯、乙酰氯、二氯亞砜、光氣、三光氣、DCC中的一種；所述的縛酸劑為三乙胺、三甲胺、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的一種。

4.根據權利要求1所述的核酸跨膜運輸載體的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中的有機溶劑B為甲醇、乙醇、丙酮、丁酮中的一種。

5.根據權利要求1所述的核酸跨膜運輸載體的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中的核酸類物質為siRNA、反義寡核苷酸、微RNA、antagomir、微RNA抑制劑、免疫刺激性核酸或U1接頭。