[發明專利]產(R)-3-羥基丁酸的重組腸道菌及其構建方法

在審

• 申請號: 202010146184.8
• 申請日: 2020-03-05
• 公開（公告）號: CN111304140A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 陳國強;閆煦
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;A61K35/741;A61K35/747;A61K35/742;A61P1/00;A61P35/00;A61P25/28;A61P3/04;A61P3/10;A61P9/12;A61P37/02;A61P9/10;A61P9/00;A61P25/08
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 吳小明

1.重組腸道菌，其包含生產3-羥基丁酸(3HB)的合成通路。

2.根據權利要求1所述的重組腸道菌，其包含優選外源引入的酰基輔酶A合成酶基因、乙酰乙酰輔酶A還原酶基因和/或硫解酶基因。

3.根據權利要求2所述的重組腸道菌，其中所述腸道菌還被敲除了乳酸脫氫酶基因。

4.根據權利要求2所述的重組腸道菌，其中所述酰基輔酶A合成酶基因、乙酰乙酰輔酶A還原酶基因和/或硫解酶基因在一個或多個質粒上表達或者被整合到所述腸道菌的基因組中表達。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的重組腸道菌，其中所述腸道菌為腸道益生菌，諸如選自大腸桿菌、乳桿菌、乳酸乳球菌、嗜熱鏈球菌、凝結芽孢桿菌、雙歧桿菌、糞腸球菌或其組合，優選選自大腸桿菌(E.coli)Nissle 1917、乳桿菌(Lactobacillus gasseri)ATCC33323和凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)DSM1。

6.根據權利要求5所述的重組腸道菌，其包含來源于羅氏真養菌的酰基輔酶A合成酶基因phaA(優選SEQ ID No.1所示的phaA)，乙酰乙酰輔酶A還原酶基因phaB(優選SEQ ID No.2所示的phaB)和來源于大腸桿菌的硫解酶基因tesB(優選SEQ ID No.3所示的tesB)。

7.根據權利要求6所述的的重組腸道菌，其中所述酰基輔酶A合成酶基因、乙酰乙酰輔酶A還原酶基因和/或硫解酶基因在P₂₃啟動子和/或J23119啟動子下表達。

8.根據權利要求6或7所述的的重組腸道菌，其中所述酰基輔酶A合成酶基因、乙酰乙酰輔酶A還原酶基因和/或硫解酶基因被整合到所述腸道菌(優選大腸桿菌)的malEK基因間的非編碼區。

9.一種制備根據權利要求1-8中任一項所述的重組腸道菌的方法，所述方法包括在腸道菌中引入3-羥基丁酸(3HB)的合成通路，特別是酰基輔酶A合成酶基因、乙酰乙酰輔酶A還原酶基因和/或硫解酶基因的步驟，和任選地敲除所述腸道菌的乳酸脫氫酶基因的步驟。

10.根據權利要求1-8中任一項所述的重組腸道菌在制備藥物中的應用，所述藥物用于治療腸炎、腸癌、阿爾茲海默癥、肥胖、糖尿病、高血壓、自身免疫疾病、癲癇、心肌缺血、再灌注損傷和/或動脈粥樣硬化。