[發明專利]編碼雞血藤查爾酮合成酶的基因及其應用

有效

• 申請號: 202010144945.6
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN111218462B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 秦雙雙;繆劍華;梁瑩;韋坤華;李林軒
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 鄧雪明

本發明公開了一種編碼雞血藤查爾酮合成酶的基因及其應用，該基因為首次從雞血藤中獲得，填補了我國傳統中藥材雞血藤中分離克隆查爾酮合成酶基因的空白。本發明所提供的查爾酮合成酶基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個或多個核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所述基因編碼的蛋白質具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸的同源序列。該基因在雞血藤根、莖、葉、花以及果實中均有表達，其中在葉和花中表達量較高。本發明提供的查爾酮合成酶基因應用與提高雞血藤中黃酮類化合物活性成分的含量，對今后雞血藤種質資源改良具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，涉及雞血藤黃酮類化合物合成途徑中的關鍵酶及其編碼基因，更具體地說，本發明涉及編碼雞血藤查爾酮合成酶的基因及其應用。

背景技術

雞血藤來源于豆科(Leguminosae)植物密花豆(Spatholobus suberectus Dunn)的干燥藤莖，為常用中藥，味苦、甘，性溫，歸肝、腎經。具有補血活血，調經止痛，舒筋活絡的功效。用于治療月經不調，痛經，經閉，風濕痹痛，麻木癱瘓，血虛萎黃等病癥，廣泛用于婦科、風濕痹痛等中成藥中。目前市場上商品雞血藤藥材主要來源于野生資源，由于多年的采收導致中國的野生資源已瀕臨枯竭。

藥用植物的次生代謝產物是中藥材藥效成分的主要來源，藥效成分形成受其代謝途徑中功能基因的調控。黃酮類化合物是植物次生代謝產物，常以游離態或與糖結合為苷的形式存在，數量種類繁多，結構類型復雜多樣，在疾病的治療過程中發揮重要的作用。黃酮類化合物是最早從雞血藤藥材中分離得到的化合物，且是雞血藤發揮藥效的主要成分，目前共分離鑒定了60個黃酮類化合物。

查爾酮合成酶是植物類黃酮物質生物合成途徑中的第一個酶，也是黃酮類化合物合成的限速酶，對植物具有非常重要的生理意義。然而，目前尚未發現雞血藤查爾酮合成酶(SsCHS)基因的克隆和作為提高植物中黃酮類化合物含量的應用研究。

發明內容

本發明的一個目的是解決至少上述缺陷，并提供至少后面將說明的優點。

本發明的另一個目的是通過基因克隆，獲得雞血藤查爾酮合成酶(簡稱SsCHS)基因的gDNA序列、cDNA序列及氨基酸序列，為后續利用生物技術手段提高雞血藤有效部位黃酮類化合物的含量提供重要基礎。

為了實現根據本發明的這些目的和其它優點，本發明提供編碼雞血藤查爾酮合成酶的gDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.1所示的序列；

2)能編碼SEQ ID No.1經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤查爾酮合成酶活性蛋白質的核苷酸序列。

編碼雞血藤查爾酮合成酶的cDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.2所示的序列；

2)在嚴格條件下與SEQ ID No.2的cDNA序列雜交且編碼具有雞血藤查爾酮合成酶活性蛋白質的DNA分子；

3)編碼SEQ ID No.3所示氨基酸序列的核苷酸序列；

4)編碼SEQ ID No.3經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤查爾酮合成酶活性蛋白質的核苷酸序列。

具有雞血藤查爾酮合成酶活性的蛋白質，其中，為下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；

2)SEQ ID No.3經添加、取代、插入或缺失一個或多個氨基酸且具有雞血藤查爾酮合成酶活性的氨基酸序列。