[發(fā)明專利]編碼雞血藤無(wú)色花青素還原酶的基因及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010144943.7
• 申請(qǐng)日: 2020-03-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111172181A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦雙雙;繆劍華;李瑩;謝月英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
• 主分類號(hào): C12N15/53
• 分類號(hào): C12N15/53;C12N9/02;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/54
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 鄧雪明

本發(fā)明公開(kāi)了一種編碼雞血藤無(wú)色花青素還原酶的基因及其應(yīng)用，填補(bǔ)了我國(guó)傳統(tǒng)中藥材雞血藤中分離克隆無(wú)色花青素還原酶基因的空白。本發(fā)明所提供的無(wú)色花青素還原酶基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸的同源序列或其等位基因及其衍生的核苷酸序列。所述基因編碼的蛋白質(zhì)具有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列或者添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸的同源序列。該基因在雞血藤根、莖、葉、花以及果實(shí)中均有表達(dá)，其中在葉和花中表達(dá)量較高，在果實(shí)中含量很低。本發(fā)明提供的無(wú)色花青素還原酶有助于利用基因工程技術(shù)提高雞血藤中活性成分兒茶素的含量，對(duì)今后雞血藤種質(zhì)資源改良具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及雞血藤活性成分兒茶素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶及其編碼基因，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及編碼雞血藤無(wú)色花青素還原酶的基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

雞血藤來(lái)源于豆科(Leguminosae)植物密花豆(Spatholobus suberectus Dunn)的干燥藤莖，為常用中藥，味苦、甘，性溫，歸肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，舒筋活絡(luò)的功效。用于治療月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，經(jīng)閉，風(fēng)濕痹痛，麻木癱瘓，血虛萎黃等病癥，廣泛用于婦科、風(fēng)濕痹痛等中成藥中。研究結(jié)果表明，雞血藤主要活性成分為黃酮類化合物，其中含量較高的黃酮類成分兒茶素起主要作用具有促進(jìn)造血等功能。

兒茶素合成途徑中，無(wú)色花青素還原酶(Leucoanthocyanidin reductase,LAR)催化無(wú)色花青素轉(zhuǎn)變?yōu)閮翰杷亍?/p>

然而，目前尚未對(duì)雞血藤LAR基因進(jìn)行克隆，也未發(fā)現(xiàn)其作為提高植物兒茶素中含量的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述缺陷，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是通過(guò)基因克隆，獲得雞血藤無(wú)色花青素還原酶(簡(jiǎn)稱SsLAR)基因的gDNA序列、cDNA序列及氨基酸序列，為后續(xù)利用生物技術(shù)手段提高雞血藤有效部位兒茶素的含量提供重要基礎(chǔ)。

為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明提供編碼雞血藤無(wú)色花青素還原酶的gDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.1所示的序列；

2)能編碼SEQ ID No.1經(jīng)添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸且具有雞血藤無(wú)色花青素還原酶活性蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

編碼雞血藤無(wú)色花青素還原酶的cDNA，其中，為下列核苷酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.2所示的序列；

2)在嚴(yán)格條件下與SEQ ID No.2的cDNA序列雜交且編碼具有雞血藤無(wú)色花青素還原酶活性蛋白質(zhì)的DNA分子；

3)編碼SEQ ID No.3所示氨基酸序列的核苷酸序列；

4)編碼SEQ ID No.3經(jīng)添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸且具有雞血藤無(wú)色花青素還原酶活性蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

具有雞血藤無(wú)色花青素還原酶活性的蛋白質(zhì)，其中，為下列氨基酸序列之一：

1)具有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；

2)SEQ ID No.3經(jīng)添加、取代、插入或缺失一個(gè)或多個(gè)氨基酸且具有雞血藤無(wú)色花青素還原酶活性的氨基酸序列。

一種用于擴(kuò)增gDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示。

一種用于擴(kuò)增cDNA的引物，其中，所述引物的序列如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示。