[發(fā)明專利]用于檢測2019新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因?qū)?yīng)mRNA的引物組及試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010144505.0 | 申請日： | 2020-03-04 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111334609B | 公開（公告）日： | 2020-12-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張萬存;張現(xiàn)偉;張耀東;朱瑩瑩;王高偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南省兒童醫(yī)院鄭州兒童醫(yī)院 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/70 | 分類號(hào)： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 付艷麗 |
| 地址： | 450017 河南省*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 檢測 2019 新型 冠狀病毒 orf1ab 基因 對應(yīng) mrna 引物 試劑盒 | ||
本發(fā)明屬于分子診斷技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測2019新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因?qū)?yīng)mRNA的引物組及試劑盒。本試劑盒逆轉(zhuǎn)錄與熒光定量PCR單管密閉完成，以隨機(jī)引物和多聚T引物作為逆轉(zhuǎn)錄的引物，將提取的mRNA逆轉(zhuǎn)為cDNA，只需一次逆轉(zhuǎn)即可適用于ORF1ab基因、N基因?qū)?yīng)mRNA的檢測。檢測過程中以2019新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因?qū)?yīng)mRNA作為檢測靶標(biāo)，以RT?qPCR作為檢測工具對2019新型冠狀病毒進(jìn)行定性檢測。本試劑盒使用的分子信標(biāo)探針可以很好的克服RT?qPCR常用的Taqman探針
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于分子診斷領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測2019新型冠狀病毒ORF1ab基因和N基因?qū)?yīng)mRNA的引物組及試劑盒。
背景技術(shù)
冠狀病毒是一個(gè)大型病毒家族，2019新型冠狀病毒是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。人感染冠狀病毒后常見體征有呼吸道癥狀、發(fā)熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等，在較嚴(yán)重病例中，感染可導(dǎo)致肺炎、嚴(yán)重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。
分子信標(biāo)(Molecular Beacon,MB)探針是一段能夠形成發(fā)卡結(jié)構(gòu)的DNA或者RNA序列，其5’端和3’端分別修飾熒光團(tuán)和猝滅團(tuán)，當(dāng)不在靶標(biāo)序列時(shí)，分子信標(biāo)呈莖環(huán)結(jié)構(gòu)，因5’端和3’端靠近，熒光團(tuán)發(fā)射的熒光被猝滅團(tuán)吸收，不產(chǎn)生熒光信號(hào)。當(dāng)存在靶標(biāo)序列時(shí)，靶標(biāo)序列與分子信標(biāo)環(huán)部結(jié)構(gòu)雜交，導(dǎo)致分子信標(biāo)從莖環(huán)結(jié)構(gòu)變成線性結(jié)構(gòu)，熒光團(tuán)和猝滅團(tuán)遠(yuǎn)離，熒光團(tuán)發(fā)射的熒光不能猝滅團(tuán)吸收，產(chǎn)生熒光信號(hào)?；谝陨戏肿有艠?biāo)特殊的檢測機(jī)制，分子信標(biāo)可以在不分離未結(jié)合探針的情況下實(shí)時(shí)檢測熒光信號(hào)。
另外，分子信標(biāo)可以區(qū)分與靶標(biāo)序列相差一個(gè)堿基的序列，與臨床上使用的Taqman探針相比，具有更高的特異性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是針對現(xiàn)行2019新型冠狀病毒ORF1ab和N基因，提供一種簡便、快速、高靈敏度及高特異性的檢測引物組。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有上述引物組的試劑盒。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明首先設(shè)計(jì)了用于檢測2019新型冠狀病毒ORF1ab基因、N基因?qū)?yīng)mRNA以及內(nèi)參RNase P基因?qū)?yīng)mRNA的上、下游引物及探針；所述探針為分子信標(biāo)探針；
檢測2019新型冠狀病毒ORF1ab基因?qū)?yīng)mRNA時(shí)，引物組為如下三組中任一組：
第一組，上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示，探針序列如SEQ ID NO.3所示；
第二組，上游引物序列如SEQ ID NO.4所示，下游引物序列如SEQ ID NO.5所示，探針序列如SEQ ID NO.6所示；
第三組，上游引物序列如SEQ ID NO.7所示，下游引物序列如SEQ ID NO.8所示，探針序列如SEQ ID NO.9所示；
檢測2019新型冠狀病毒N基因?qū)?yīng)mRNA時(shí)，引物組為以下三組中的任一組：
第一組，上游引物序列如SEQ ID NO.10所示，下游引物序列如SEQ ID NO.11所示，探針序列如SEQ ID NO.12所示；
第二組，上游引物序列如SEQ ID NO.13所示，下游引物序列如SEQ ID NO.14所示，探針序列如SEQ ID NO.15所示；
第三組，上游引物序列如SEQ ID NO.16所示，下游引物序列如SEQ ID NO.17所示，探針序列如SEQ ID NO.18所示；
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