[發明專利]一種基于2,4-二氧四氫喋啶合酶的新型冠狀病毒S蛋白雙區域亞單位納米疫苗

有效

• 申請號: 202010144031.X
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN111217918B
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發明（設計）人: 張輝;馬顯才;鄒帆;袁耀昌;李镕;張旭
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/10;C12N15/62;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/385;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一種提高冠狀病毒抗原免疫原性的方法，其特征在于，所述方法是將病毒的受體結合域(Receptor binding domain,RBD)和融合肽(Fusion peptide,FP)共同作為雙抗原，并與2,4-二氧四氫喋啶合酶多聚物蛋白(Lumazine Synthase,LS)融合組成一個新的融和蛋白LS-RBD-FP后作為抗原；

其中，受體結合域RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

融合肽FP的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

2,4-二氧四氫喋啶合酶多聚物蛋白LS的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述冠狀病毒抗原為新型冠狀病毒SARS-CoV-2抗原，所述冠狀病毒的受體結合域RBD和融合肽FP為新型冠狀病毒SARS-CoV-2的受體結合域RBD和融合肽FP。

3.根據權利要求2所述方法，其特征在于，所述新型冠狀病毒SARS-CoV-2抗原為新型冠狀病毒SARS-CoV-2的表面刺突蛋白(S蛋白)抗原。

4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，新型冠狀病毒SARS-CoV-2的RBD的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，FP的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，SEQ ID NO:1與SEQ ID NO:2可以直接連接，或兩者以鉸鏈區Linker相連構成一個新的融和蛋白RBD-FP。

5.根據權利要求4所述方法，其特征在于，當所述Linker為GGSGGSGGSGGSGGG時，所得融和蛋白RBD-FP的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

6.根據權利要求4所述方法，其特征在于，所述Lumazine Synthase(LS)的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；SEQ ID NO:4與SEQ ID NO:3可以直接連接，或兩者以鉸鏈區Linker相連構成一個新的融和蛋白LS-RBD-FP。

7.根據權利要求6所述方法，其特征在于，當所述Linker為GGSGGSGGSGGSGGSGGG時，所得融和蛋白LS-RBD-FP的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

8.根據權利要求1-7任一所述方法，其特征在于，融和蛋白再加上信號肽后，利用真核表達系統表達出抗原。

9.根據權利要求8所述方法，其特征在于，所述信號肽為分泌型信號肽(Signalpeptide,SP)。

10.根據權利要求8所述方法，其特征在于，新型冠狀病毒SARS-CoV-2的SP、LS、RBD與FP融合的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

11.根據權利要求8所述方法，其特征在于，在SEQ ID NO:6融和蛋白加上純化標簽后，可用于融合蛋白的純化。

12.根據權利要求11所述方法，其特征在于，所述純化標簽為His標簽(His-tag)；新型冠狀病毒SARS-CoV-2納米疫苗的SP、LS、RBD、FP與His-tag融合的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

13.一種免疫原性提高的冠狀病毒抗原，其特征在于，依據權利要求1-12任一所述方法構建得到的新的融合蛋白LS-RBD-FP。

14.根據權利要求13所述冠狀病毒抗原，其特征在于，融合蛋白LS-RBD-FP的氨基酸序列如SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示。

15.權利要求13或14所述冠狀病毒抗原在制備抗冠狀病毒藥物方面的應用。