[發(fā)明專利]一種高效抗敏止癢的桃膠多糖及其發(fā)酵提取方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010141932.3
• 申請日: 2020-03-04
• 公開（公告）號: CN111235197A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阮仁全
• 申請（專利權(quán)）人: 美爾健（深圳）生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/14
• 分類號: C12P19/14;C12P19/04;C12N15/81;C12N15/56;A61K31/715;A61P37/08;A61P17/04;A61K8/73;A61Q19/00;C12R1/84
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 趙孟琴;繆利明

本發(fā)明公開了一種高效抗敏止癢的桃膠多糖的發(fā)酵提取方法，包括：步驟一、將浸泡后的桃膠、超純水和可表達半乳聚糖酶的酵母菌干粉按1:5～100:0.01～0.1的比例混合，攪拌發(fā)酵；步驟二、當(dāng)發(fā)酵液的粘稠度降低到200～1000mPa.s時，停止攪拌，倒出發(fā)酵液，加入無水乙醇至乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％～90％，靜置，去上清；步驟三、采用乙醇洗滌下層沉淀，減壓抽濾后冷凍干燥，獲得桃膠多糖。本發(fā)明還公開了一種高效抗敏止癢的桃膠多糖以及所述的桃膠多糖的應(yīng)用及在制備抗敏止癢的護膚品中的應(yīng)用。本發(fā)明的桃膠多糖的發(fā)酵提取方法，其能耗低、環(huán)保。采用本發(fā)明的方法獲得的桃膠多糖，具有抗敏止癢的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體地說，是關(guān)于一種高效抗敏止癢的桃膠多糖及其發(fā)酵提取方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

桃膠具有多種藥用價值，在醫(yī)藥和美容方面的主要作用是降血脂、降血糖、皮膚保濕等功效。桃膠的分子量大、結(jié)構(gòu)高度交聯(lián)，溶解困難。可溶性桃膠多糖的制備通常可以用水浸脹水解提取法，以及改進的醇提、高壓等幾種方法，盡管改善了桃膠多糖的溶解性，分子量大大降低，但是產(chǎn)物的均一性較差、產(chǎn)物分子量分布較寬，皮膚屏障或腸道粘膜系統(tǒng)對桃膠多糖吸收有一定的阻礙和屏障作用，生物利用率較低。因此，有必要研究一種更有利于桃膠多糖被生物體有效利用的方法，以促進桃膠在醫(yī)藥或美容護膚方面的應(yīng)用。鑒于生物體內(nèi)多糖多是糖單元的聚合物而成，將多糖通過特定方法裂解為寡糖，可有效降低產(chǎn)物的分子量，便于生物體的吸收，也有望提升產(chǎn)物的生物活性。近年來，微生物產(chǎn)酶裂解桃膠多糖的研究有所發(fā)展，國外的研究從以溶解的桃膠多糖為碳源的黃曲霉培養(yǎng)物中分別分離出了黃曲霉胞內(nèi)和胞外分泌的可以水解桃膠多糖的粗酶，國內(nèi)有研究從卡拉膠裂解的菌株中篩選高表達半乳聚糖酶的菌株用于桃膠裂解和多糖的提取。

然而，高活性、高穩(wěn)定性的半乳聚糖酶菌株的篩選和保存是一項具有挑戰(zhàn)性的工作。天然菌株的表達量隨著繁殖代數(shù)的增加會引起活性和穩(wěn)定性下降。天然菌株需要特定的培養(yǎng)基條件，因此在發(fā)酵過程中引入的成分和產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物不可避免引入新的雜質(zhì)，增加后期多糖純化的難度，以及對產(chǎn)品的使用帶來不可控的風(fēng)險。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明利用酵母工程菌，通過DNA重組技術(shù)引入半乳聚糖酶基因序列，以粗提取的桃膠多糖作為營養(yǎng)培養(yǎng)液，以糖類成分作為碳源，微量植物蛋白作為氮源，維持酵母菌生長，讓酵母菌產(chǎn)生半乳聚糖酶，形成分泌在細(xì)胞壁外側(cè)的胞外蛋白，但不釋放進入到培養(yǎng)液中。從而定向酶解交聯(lián)的桃膠多糖，釋放分子量更小的多糖單體，從而提高多糖的生物利用率。因此，本發(fā)明的第一個目的是提供一種高效抗敏止癢的桃膠多糖的發(fā)酵提取方法，以解決現(xiàn)有的桃膠多糖的提取方法均一性差、產(chǎn)物分子量分布較寬的問題。本發(fā)明的第二個目的是提供一種采用上述的發(fā)酵提取方法獲得的高效抗敏止癢的桃膠多糖。本發(fā)明的第三個目的是提供一種所述的高效抗敏止癢的桃膠多糖的應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

作為本發(fā)明的第一個方面，一種高效抗敏止癢的桃膠多糖的發(fā)酵提取方法，包括如下步驟：

步驟一、將浸泡后的桃膠、超純水和表達半乳聚糖酶的酵母菌干粉按1:5～100:0.01～0.1的比例混合，然后倒入發(fā)酵罐中恒溫、恒速攪拌發(fā)酵；

步驟二、當(dāng)發(fā)酵液的粘稠度降低到200～1000mPa.s時，停止攪拌，倒出發(fā)酵液，加入無水乙醇至乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％～90％，靜置，去上清；

步驟三、采用乙醇洗滌下層沉淀，減壓抽濾后冷凍干燥，獲得桃膠多糖。

根據(jù)本發(fā)明，步驟一的桃膠、超純水和表達半乳聚糖酶的酵母菌干粉的比例為1:10:0.01。

較佳的，步驟二加入無水乙醇至乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％時，靜置。

根據(jù)本發(fā)明，步驟一的可表達半乳聚糖酶的酵母菌干粉的制備方法包括如下步驟：