[發明專利]一種激素的工程菌及構建表達方法

在審

• 申請號: 202010141620.2
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN113337529A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 吳曉芳;廖翔;張延勇;陳丹;鄭文芝;胡穎嵩;劉娟;李鼎鋒;陳健平;劉勇
• 申請（專利權）人: 北京安百勝生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 欒星明;王子楠

1.一種原核表達載體，其包含與調控元件可操作地連接的生長激素編碼序列，所述原核表達載體不包含阻遏蛋白的表達盒。

2.權利要求1的原核表達載體，其中所述調控元件包括啟動子、負操縱元件和/或正操縱元件。

3.權利要求1或2的原核表達載體，其中所述啟動子元件選自lac啟動子、lacUV5啟動子、tac啟動子或trc啟動子。

4.權利要求3的原核表達載體，其中所述負操縱元件為lacO操縱基因。

5.權利要求4的原核表達載體，其中所述正操縱元件為CAP結合位點。

6.權利要求1-5任一項的原核表達載體，其中所述阻遏蛋白的表達盒為lacI表達盒或lacIq表達盒。

7.權利要求1-6任一項的原核表達載體，所述生長激素為人生長激素。

8.權利要求7的原核表達載體，所述生長激素還包含信號肽。

9.權利要求8的原核表達載體，所述信號肽為OmpA或STII。

10.權利要求1-9任一項的表達載體，其中所述載體衍生自pRec1.3、pQE、pMD18T或啟動子改造為lacUV5的pMD18TM。

11.一種宿主細胞，其包含至少一種權利要求1-10中任一項的表達載體，或由權利要求1-10中任一項的表達載體轉化。

12.權利要求11的宿主細胞，所述宿主細胞選自W3110、JM109或BL21(DE3)。

13.一種產生生長激素的方法，包括，

(i)在允許生長激素表達的條件下培養權利要求11或12的宿主細胞，和

(ii)回收由所述宿主細胞產生的生長激素；

(iii)任選地，純化步驟(ii)回收的生長激素。

14.權利要求13的方法，所述步驟(i)的培養在培養基中進行，所述培養基選自LB培養基、葡萄糖發酵培養基或高密度發酵培養基。

15.權利要求14的方法，所述步驟(i)分為生長階段與表達階段，所述生長階段與表達階段之間不添加誘導劑。

16.權利要求14的方法，所述步驟(i)分為生長階段與表達階段，所述生長階段與表達階段之間添加誘導劑。

17.權利要求16的方法，所述誘導劑為乳糖或IPTG。

18.權利要求17的方法，所述乳糖的濃度為0.05mg/ml-1mg/ml。

19.權利要求18的方法，所述生長階段為4-6小時，所述表達階段為10-25小時。

20.權利要求19的方法，所述生長階段的培養溫度為大約30℃-大約37℃，所述表達階段的培養溫度為大約37℃。