[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）的檢測(cè)方法和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010140787.7
• 申請(qǐng)日: 2020-03-03
• 公開（公告）號(hào): CN113337638A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王金;趙國(guó)屏;黃衛(wèi)人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海吐露港生物科技有限公司;深圳市第二人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;祝蓮君

本發(fā)明提供了一種新型冠狀病毒(SARS?CoV?2)的檢測(cè)方法和試劑盒。本發(fā)明的檢測(cè)方法包括：(a)提供一含核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的待核驗(yàn)樣品；(b)將所述待核驗(yàn)樣品與增敏試劑或含所述增敏試劑的增敏緩沖液進(jìn)行混合，從而形成一檢測(cè)體系，其中，所述的增敏試劑包括：向?qū)NA、Cas蛋白、和增敏核酸探針；和(c)檢測(cè)所述檢測(cè)體系中的所述增敏核酸探針是否被所述Cas蛋白切割。根據(jù)該方法的特點(diǎn)，將其命名為SENA(Specific Enhancement for Nucleic Acid Amplification Assays)，用于新冠病毒PCR反應(yīng)產(chǎn)物的專一增敏。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及新型冠狀病毒的檢測(cè)方法和試劑盒。本發(fā)明還涉及一種用于核酸分子擴(kuò)增產(chǎn)物增敏檢測(cè)的方法和試劑盒。

背景技術(shù)

冠狀病毒是一種具有包膜的正鏈單股RNA冠狀病毒，它造成了于2019年爆發(fā)的急性呼吸道病毒疾病。2月11日，國(guó)際病毒分類委員會(huì)指定病毒名稱為severe acuterespiratory syndrome coronavirus 2，縮寫為SARS-CoV-2，即“嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2型”。由其引發(fā)的疾病則被世界衛(wèi)生組織命名為“COVID-19”，即“2019年冠狀病毒疾病”。

在COVID-19的臨床檢查中，咽拭子、鼻拭子、下呼吸道灌洗液、糞便等樣本的核酸檢測(cè)目前是確診SARS-CoV-2病毒最有效的方式。然而，由于疫情爆發(fā)倉(cāng)促，沒有留給IVD公司充足的時(shí)間研發(fā)和驗(yàn)證試劑性能和有效性，導(dǎo)致目前臨床使用的試劑靈敏度和特異性等關(guān)鍵指標(biāo)良莠不齊。

此外，由于SARS-CoV-2在咽喉、鼻子和上呼吸道等部位的數(shù)量較少，則導(dǎo)致檢測(cè)的準(zhǔn)確性顯著下降，尤其在潛伏期或感染早期時(shí)更難以準(zhǔn)確地檢測(cè)出SARS-CoV-2，這也導(dǎo)致了COVID-19的傳染風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步增大。

SARS-CoV-2病毒qRT-PCR檢測(cè)具有高的靈敏度和專一性，因此，是目前被廣泛接受的判斷病毒感染的標(biāo)準(zhǔn)。但是，當(dāng)被檢樣本中的病毒核酸含量很低而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的Ct值接近甚至大于40時(shí)，則面臨很難判斷樣本為“弱陽(yáng)性”還是“真陰性”的窘境。

目前，雖然可以采用深度測(cè)序的方法作進(jìn)一步判斷，但是，該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力費(fèi)錢。此外，雖然也可以結(jié)合臨床癥狀或治療效果作綜合判斷，但是，該方案不僅費(fèi)時(shí)，而且不安全，也無法統(tǒng)一判斷的標(biāo)準(zhǔn)，從而導(dǎo)致結(jié)果不精準(zhǔn)。

因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)快速、簡(jiǎn)便、高效而準(zhǔn)確的檢測(cè)SARS-CoV-2的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速、簡(jiǎn)便、高效而準(zhǔn)確的檢測(cè)SARS-CoV-2的方法和試劑盒。

本發(fā)明的另一目的是提供一種對(duì)靶標(biāo)核酸分子擴(kuò)增后進(jìn)一步進(jìn)行高效增敏的檢測(cè)方法。

在本發(fā)明第一方面，提供了一種靶標(biāo)核酸分子的檢測(cè)方法，包括步驟：

(a)提供一含核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的待核驗(yàn)樣品，其中所述的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物為對(duì)疑似含有靶標(biāo)核酸分子的檢測(cè)樣本進(jìn)行基于所述靶核酸分子的特異性擴(kuò)增而獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物；

(b)將所述待核驗(yàn)樣品與增敏試劑或含所述增敏試劑的增敏緩沖液進(jìn)行混合，從而形成一檢測(cè)體系，其中，所述的增敏試劑包括：向?qū)NA、Cas蛋白、和增敏核酸探針，其中，所述的向?qū)NA特異性針對(duì)所述的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物；和

(c)檢測(cè)所述檢測(cè)體系中的所述增敏核酸探針是否被所述Cas蛋白切割，其中，如果所述增敏核酸探針被切割，則提示所述檢測(cè)樣本中含有靶標(biāo)核酸分子；如果所述增敏核酸探針未被切割，則提示所述檢測(cè)樣本中不含有靶標(biāo)核酸分子。

在另一優(yōu)選例中，所述的靶標(biāo)核酸包括靶標(biāo)DNA和靶標(biāo)RNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物為DNA產(chǎn)物。