[發明專利]一種新冠病毒的雙靶向免疫增強型多價疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 202010139818.7
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN111358943A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 楊曌;黃忠沿
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬永川醫院
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 重慶市諾興專利代理事務所(普通合伙) 50239
• 代理人: 劉興順

本發明公開了一種新冠病毒的雙靶向免疫增強型多價疫苗及其制備方法，該疫苗為nCoV多價表位肽與ACE?2基因重組表達載體的復合物；nCoV1多價表位肽/nCoV2多價表位肽/nCoV3多價表位肽分別由表位nCoV480?493/nCoV499?512/nCoV120?133與穿膜序列WYSPKLWMR、表位nCoV 586?600/表位nCoV 128?142/表位nCoV 420?434和接頭序列組成，穿膜序列位于氨基端，表位nCoV 586?600/表位nCoV 128?142/表位nCoV 420?434序列位于羧基端，表位與穿膜序列或表位與表位之間以接頭序列連接；該疫苗可成通過穿膜序列進入細胞，有效促進新冠病毒抗原表位nCoV1/nCoV2/nCoV3進入抗原遞呈途徑激發特異性B細胞和CD4+T細胞應答，同時ACE2基因在細胞內表達生成ACE2蛋白，刺激機體產生ACE2抗體，從而封閉細胞ACE2蛋白，達到阻斷病毒通過S蛋白結合ACE2蛋白的作用。

技術領域

本發明涉及一種多價疫苗，特別涉及一種新冠病毒的雙靶向免疫增強型多價疫苗及該疫苗的制備方法。

背景技術

2019年新型冠狀病毒(2019 novel Coronavirus,2019-nCoV)的流行規模迅速增大,其大規模感染對人民的生活造成極大的影響。目前2019-nCoV引起的新冠肺炎病例已在全球多個國家發現，世界衛生組織(WHO)宣布2019-nCoV列為國際關注的突發公共衛生事件。新型冠狀病毒的基因組編碼了刺突蛋白(Spike protein:S)、包膜蛋白(Envelopeprotein:E)、膜蛋白(Membrane glycoprotein:M)和核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein:N)等結構蛋白,刺突蛋白介導與宿主的受體結合和膜融合。

由于冠狀病毒滅活疫苗或減毒疫苗在正常人體應用時存在潛在的危險性，因此分子量小、安全性高的多肽疫苗是新型疫苗研究的重點。而研究多肽疫苗的第一步是從新型冠狀病毒的基因序列中找出有免疫原性的抗原表位或抗原決定簇。現代疫苗理論認為，最有效的疫苗需要包含B細胞和CD4+T細胞抗原表位，從而既能夠有效誘導體液免疫。鑒于重要靶點S蛋白在病毒侵入細胞中的重要作用，一些S蛋白已經獲得了有效的疫苗。

ACE2由805個氨基酸組成，是具有單一胞外催化結構域的I型跨膜糖蛋白。人類ACE2基因已經被克隆并被定位到X染色體上。像ACE一樣，ACE2有兩個結構域:氨基末端催化結構域和羧基末端結構域。ACE2主要在心臟、腎臟和睪丸中定位，通常定位于上皮細胞的腔面。冠狀病毒通過表達ACE2的細胞腔面進行感染時，其感染效力提高10倍。冠狀病毒以Clathrin蛋白依賴性方式與ACE2結合并內在化，以使其進入細胞。膜融合是通過蛋白酶Spike介導激活，病毒RNA被釋放到細胞質中，從而引發冠狀病毒感染。

由于細胞膜的屏障作用，生物大分子不能自由進入細胞。近年來，一些具有細胞膜穿透能力的小分子多肽相繼被發現，其可有效攜帶外源性大分子進入細胞，并對宿主細胞沒有顯著毒副作用。這些具有細胞穿透能力的多肽被命名為細胞穿膜肽(CPP)。研究發現，WYSPKLWMR可有效促進與之偶聯的外源表位進入MHC-Ⅰ類抗原遞呈途徑，表現為動力學顯著增強，且該過程表現為蛋白酶體/TAP非依賴、氨基肽酶依賴。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種新冠病毒的免疫增強型多價疫苗，目的之二在于提供所述新冠病毒的免疫增強型多價疫苗的制備方法。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

新冠病毒的免疫增強型多價疫苗，其特征在于：該疫苗為nCoV1多價表位肽、nCoV2多價表位肽、nCoV3多價表位肽與ACE2基因重組表達載體的的復合物；

所述nCoV1多價表位肽由穿膜序列WYSPKLWMR、新冠病毒S蛋白B細胞表位nCoV480-493：QHTDINFTATASFG、接頭序列：AYAY、新冠病毒S蛋白CD4細胞表位nCoV586-600：YTSYTIVGALYVTWS組成；