[發明專利]新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010138690.2
• 申請日: 2020-03-03
• 公開（公告）號: CN111118225A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 王雅琦;董嘉;凌云峰;李琛;劉宇;張華
• 申請（專利權）人: 蘇州銳訊生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 蔣慧妮

1.新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒，其特征在于：包括有反應液，所述反應液中含有用于檢測COVID-19ORF1ab基因及COVID-19N基因的引物及探針，其中，用于檢測COVID-19ORF1ab基因的引物及探針包括由SEQ ID NO：1所示的正向引物，由SEQ ID NO：2所示的反向引物及由SEQ ID NO：3所示的探針；所述探針的兩端標記有熒光基團；

用于檢測COVID-19N基因的引物及探針包括由SEQ ID NO：4所示的正向引物，由SEQ IDNO：5所示的反向引物及由SEQ ID NO：6所示的探針，所述探針的兩端標記有熒光基團。

用于檢測人類RNA內參基因的引物及探針包括由SEQ ID NO：7所示的正向引物，由SEQID NO：8所示的反向引物及由SEQ ID NO：9所示的探針，所述探針的兩端標記有熒光基團。

2.如權利要求1所述的新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒，其特征在于：所述SEQ ID NO：3所示的探針5’端標記有FAM。

3.如權利要求1所述的新型冠狀病毒核酸檢測微滴式PCR試劑盒，其特征在于：SEQ IDNO：6所示的探針5’端標記有HEX。

4.如權利要求1所述的新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒，其特征在于：SEQID NO：9所示的探針5’端標記有Cy5或者ROX。

5.如權利要求1-4中任意一種所述的新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒的應用，其特征在于：所述試劑盒用于新型冠狀病毒COVID-19核酸的檢測。

6.如權利要求1-4中任一所述的新型冠狀病毒核酸檢測微滴式數字PCR試劑盒檢測方法，其特征在于：包括如下步驟，

S1，采集樣品，取得樣品采集液；

S2、制備微滴，將提取純化的RNA樣本和PCR反應液混合，加入到樣品孔中，并在油孔中滴加油，制備生成微滴；

S3、PCR擴增，將生成的微滴進行PCR擴增，所述擴增條件為，在47-50℃下逆轉錄10min，在97℃下預變性10min，在95.3℃下變性30s，50-52℃下退火、延伸1min，共進行40個循環，在98℃下酶滅活10min,在20℃下冷卻；

S4、液滴檢測，對擴增結果進行讀取，分析，利用泊松分布原理進行統計與分析。