[發(fā)明專利]一種制備修飾MSCs的方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010137804.1
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111321113A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設計）人: 田俊;韋曦;施松濤
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬口腔醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/10;A61K35/28;A61P1/00;A61P1/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發(fā)明公開了一種制備修飾MSCs的方法及其應用，本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)有技術中MSCs不能于心理應激下有效實現(xiàn)MSCT療效的原因，通過使用clathrin抑制劑、BECN1 siRNA、STAT3激活劑和let?7k抑制劑中的其中一種對MSCs進行處理，制備得到修飾的MSCs，可重現(xiàn)實現(xiàn)MSCT的療效；為制備治療結腸炎，特別是心理縛應激結腸炎的藥物提供了新的思路，具有重要的醫(yī)學前景。

技術領域

本發(fā)明涉及生物技術領域，涉及一種MSCs，具體涉及一種制備修飾MSCs的方法及其應用。

背景技術

由于MSCs間充質干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)來源廣泛，易于獲取，安全性好，具有顯著的免疫抑制能力。間充質干細胞移植(MSC transplantation，MSCT)已被應用于動物模型中治療各種自身免疫病(系統(tǒng)性硬化癥，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，實驗性自身免疫性腦脊髓炎和移植物抗宿主病等)、炎癥性疾病(膿毒癥和急性潰瘍性腸炎等)以及過敏性疾病(哮喘和接觸性皮炎等)等，并取得較好的療效。

然而MSCs的免疫調節(jié)功能顯著受到宿主體內微環(huán)境影響。例如若宿主體內缺乏TNF-α和IFN-γ等炎癥因子，MSCs的免疫調節(jié)功能將被顯著抑制。心理應激普遍存在于炎癥性疾病患者中，而心理應激顯著改變機體微環(huán)境；在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)MSCT可有效緩解結腸炎小鼠的癥狀，但無法治療處于心理應激狀態(tài)的結腸炎小鼠。因此，以往傳統(tǒng)MSCT利用統(tǒng)一的MSCs治療疾病沒有考慮到宿主自身的體內微環(huán)境，可能導致一些患者治療失敗。

因此，亟需要開發(fā)可用于治療心理應激狀態(tài)的結腸炎的藥物。

發(fā)明內容

針對上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種可可用于治療心理應激狀態(tài)的結腸炎的藥物。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為：一種制備修飾MSCs的方法，用clathrin抑制劑、BECN1 siRNA、STAT3激活劑和let-7k抑制劑中的其中一種對MSCs進行預處理。

其中，BECN1 siRNA、STAT3激活劑和let-7k抑制劑均可調控MSCs的自噬水平，而自噬在調節(jié)MSC的免疫調節(jié)功能中發(fā)揮著重要作用。

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，所述clathrin抑制劑為Pitstop2；所述STAT3激活劑為colivelin。

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，使用所述clathrin抑制劑或所述STAT3激活劑制備修飾MSCs的方法為將clathrin抑制劑或STAT3激活劑直接加入MSCs培養(yǎng)基中；使用所述siRNA或所述let-7k抑制劑制備修飾MSCs的方法為利用Lipofectamine RNAiMAX以及Opti-MEM將所述siRNA或所述let-7k抑制劑轉染MSCs。

本發(fā)明還要求保護根據所述方法制備得到的修飾MSCs。

本發(fā)明還要求保護所述的修飾MSCs在制備治療結腸炎的藥物中的應用

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，所述結腸炎為處于心理應激的結腸炎。

進一步地，本發(fā)明還提供了一種用于治療結腸炎的組合物，所述組合物包括所述的修飾MSCs。

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，還包括藥學上可接受的輔料。

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，所述組合物的劑型為注射劑。

作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，所述結腸炎為處于心理應激的結腸炎。