[發(fā)明專利]一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010137666.7
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111321178B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 戴悅;馬克·博科拉;陳海濱;張迎新;托馬斯·道斯曼
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波酶賽生物工程有限公司
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C12R1/19
• 代理公司: 寧波成舟專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33306
• 代理人: 高經(jīng)

1.一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

以L-蘇氨酸為原料，利用蘇氨酸脫氨酶將L-蘇氨酸轉(zhuǎn)化為2-丁酮酸；

利用氨基酸脫氫酶將2-丁酮酸轉(zhuǎn)化為L-2-氨基丁酸；

在酰胺酶的催化作用下，將L-2-氨基丁酸反應(yīng)成L-2-氨基丁酰胺；

所述L-2-氨基丁酰胺制備方法的步驟具體包括：

將含有重組載體的大腸桿菌菌株接種于種子培養(yǎng)基中進行振蕩培養(yǎng)，得到種子液；所述的重組載體包含蘇氨酸脫氨酶的編碼基因、氨基酸脫氫酶的編碼基因以及酰胺酶的編碼基因；所述氨基酸脫氫酶的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO:2所示；所述蘇氨酸脫氨酶的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO:4所示；所述酰胺酶的氨基酸序列如序列表SEQ?ID?NO:6所示；

將上述種子液接種于含有L-蘇氨酸的發(fā)酵培養(yǎng)基中，得到發(fā)酵液；

將上述發(fā)酵液的pH值控制在6.5~7.5，同時對發(fā)酵液進行攪拌發(fā)酵，當(dāng)發(fā)酵液的OD600為10~15時，往發(fā)酵液中加入誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)蘇氨酸脫氨酶、氨基酸脫氫酶和酰胺酶表達，并繼續(xù)進行攪拌發(fā)酵，得到L-2-氨基丁酰胺；

每升所述含有L-蘇氨酸的發(fā)酵培養(yǎng)基中包括以下組分：L-蘇氨酸60~80g、酵母粉4~6g、胰蛋白胨1~3g、(NH₄)₂SO_4?1~3g、K₂HPO₄?3~5g、KH₂PO_4?3~5g、MgSO₄?0.3~1g、一水合檸檬酸0.1~0.5g、MnCl_2?0.05~0.1g；

所述的誘導(dǎo)劑為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，每升所述的種子培養(yǎng)基中包括以下組分：酵母粉4~6g、蛋白胨8~12g、NaCl?4~6g、MgSO₄?0.5~1.5g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，所述含有L-蘇氨酸的發(fā)酵培養(yǎng)基與種子液的體積比為100:(3~5)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，所述的步驟還包括：

當(dāng)發(fā)酵液中L-蘇氨酸的質(zhì)量濃度低于10~15g/L時，按照每升發(fā)酵液補加20~40g的量往發(fā)酵液中補加L-蘇氨酸，并重復(fù)該步驟3~5次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，每升所述的發(fā)酵液中添加的誘導(dǎo)劑的質(zhì)量為1~3g。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，所述的步驟中，振蕩培養(yǎng)的溫度為32~37℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種L-2-氨基丁酰胺的制備方法，其特征在于，所述的步驟中，攪拌發(fā)酵的溫度為32~37℃。