[發明專利]一種水源水中多種游離氨基酸同時檢測的固相萃取-液相檢測方法

在審

• 申請號: 202010137435.6
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111398436A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 馬曉雁;陳鏡吉;陸思嘉;宋亞麗
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所(普通合伙) 33230
• 代理人: 馮年群

本發明提供一種水源中多種游離氨基酸同時檢測的固相萃取?液相檢測方法。包括如下步驟：采集水樣，對水樣進行預處理；對預處理后的水樣經過固相萃取技術進行富集和提純，得到樣品A；對樣品A進行衍生化處理，得到樣品B；對樣品B進行液液萃取，得到最終樣品C；將樣品C經過高效液相色譜進行分析，最終檢測出水樣中游離氨基酸的濃度；制備游離氨基酸的標準溶液，經過高效液相色譜的分析，最終檢測出標準溶液中游離氨基酸的濃度，用于樣品C檢測出游離氨基酸濃度的驗證。本發明將除雜柱與吸附柱聯用完成氨基酸的純化及富集過程，柱前衍生將其轉化為有紫外吸收或者熒光特性的衍生物與高效液相色譜聯用和同時測定水源中13種游離氨基酸。

技術領域

本發明涉及水質檢測領域，具體涉及一種水源中多種游離氨基酸同時檢測的固相萃取-液相檢測方法。

技術背景

氨基酸是生物體內必不可少的一類物質，是合成蛋白質與遺傳物質的基本單位，也是水中天然有機物的組成部分，幾乎可以在所有類型的天然水體中檢出，包括地表水與飲用水。地表水體中的氨基酸主要來源于藻類的代謝以及污、廢水排放。水源水中的氨基酸濃度水平一般為20～1000μg/L，占水體可溶性有機碳(DOC)的2～13％，也是水體中可溶性有機氮(DON)的重要組成部分。

氨基酸是水中天然有機物的主要組成部分，也是飲用水中的消毒副產物，尤其是含氮消毒副產物的主要前體物。因此，對水源水中的氨基酸種類及含量的準確測定，對于飲用水消毒副產物的識別與控制等具有重要意義。

目前常見測定氨基酸的方法有高效陽離子交換色譜-柱后茚三酮衍生分光光度法，這是最早測定氨基酸的方法，利用酸性條件下，氨基酸變成陽離子形式，在離子交換柱的作用下分離，用茚三酮發生顯色反應，最后用紫外檢測器檢測，這種方法適用于大多數氨基酸測定，但靈敏度低、檢測限高且不穩定；氣相色譜法是以氣體作為流動相，將氨基酸衍生為易揮發但又不容易發生分解的衍生物，柱效高，分離時間短，易與質譜儀連用，但與羥基、吲哚基反應不徹底；毛細管電泳法是利用石英毛細管在電場的作用下，利用不同樣品遷移速度的不同而達到分離的目的，微量、靈敏、柱效高，無須梯度洗脫，可用于氨基酸手性分離的分析；陰離子交換色譜-積分脈沖安培法主要是利用氨基酸轉化為陰離子，被金屬電極所氧化，檢測產生的電流,對氨基酸進行定量，可不發生柱前衍生反應直接測定，但電極難以清理，難以重復利用。

發明內容

水源及飲用水系統中氨基酸含量低，且干擾因素多，需采用適當的預處理方法進行富集及提純，本發明采用固相萃取技術預處理，目的在于解決上述技術問題，將除雜柱與吸附柱聯用完成氨基酸的純化及富集過程，柱前衍生將其轉化為有紫外吸收或者熒光特性的衍生物與高效液相色譜聯用和同時測定水源中13種游離氨基酸，提供一種水源中多種游離氨基酸同時檢測的固相萃取-液相檢測方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種水源水中多種游離氨基酸同時檢測的固相萃取-液相檢測方法，包括如下步驟：

S1、采集水樣，對水樣進行預處理；

S2、對步驟S1中預處理后的水樣經過固相萃取進行富集和提純，得到樣品A；

S3、對步驟S2中得到的樣品A進行柱前衍生處理，得到樣品B；

S4、對步驟S3中得到的樣品B進行液液萃取，得到最終樣品C；

S5、將步驟S4中得到的樣品C經過高效液相色譜進行分析，所述高效液相色譜的液相色譜分離流動相由0.1mmol/L乙酸銨和乙腈組成，最終檢測出水樣中游離氨基酸的濃度；

S6、制備游離氨基酸的標準溶液，經過所述高效液相色譜的分析，最終檢測出標準溶液中游離氨基酸的濃度，用于步驟S5中檢測出游離氨基酸濃度的驗證。

作為優選的，所述步驟S1中的預處理包括如下步驟：水樣經過 0.45μm玻璃纖維膜進行過濾，并用鹽酸將pH調至1.3，得到預處理后的水樣。