[發明專利]一種抗BRCA1單克隆抗體及其用途

有效

• 申請號: 202010135544.4
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111253483B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 劉晗青;屠志剛
• 申請（專利權）人: 江蘇萊森生物科技研究院有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574;C12R1/91
• 代理公司: 南京智造力知識產權代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

本發明屬于診斷技術領域，具體涉及一種抗BRCA1單克隆抗體及其用途。本發明以純化后的BRCA1蛋白片段作為免疫原，免疫小鼠后提取免疫成功的小鼠脾臟淋巴細胞，通過細胞融合技術將淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞進行融合，經過二輪亞克隆篩選后獲得穩定分泌抗BRCA1的單克隆抗體的雜交瘤細胞株，從而獲得抗BRCA1單克隆抗體，本發明的抗BRCA1單克隆抗體可用于檢測BRCA1蛋白的生物學檢測試劑，并應用在制備卵巢癌相關檢測產品中。

技術領域

本發明屬于生物診斷技術領域，具體涉及一種抗BRCA1單克隆抗體及其用途。

背景技術

卵巢癌是婦科腫瘤中最常見的惡性腫瘤之一，也是最為致命的女性生殖系統癌癥，死亡率位于婦科腫瘤首位。大量病例對照研究及臨床報告資料顯示，卵巢癌的發生與遺傳因素有著密切聯系，卵巢癌家族史是卵巢癌發病最重要的危險因素。遺傳性乳腺癌和卵巢癌的易感基因BRCA1（breast and ovarian cancer susceptibility gene）的突變在遺傳性卵巢癌的發生、發展中具有重要作用，且其突變率與家族中具有卵巢癌病史的人數呈正相關。研究表明，BRCA1突變與多數遺傳性卵巢癌相關，且主要在遺傳性及早發性卵巢癌中起作用。BRCA1在遺傳性卵巢癌患者中的突變率最高約為50％~100％，在卵巢患者的1~3級親屬中突變攜帶率約10％~30％，而在普通人群中僅不到0.1％，BRCA1基因的突變以常染色體顯性遺傳的方式遺傳給子代。BRCA1作為一種腫瘤抑制基因，在正常卵巢上皮細胞中起重要的轉錄調控作用，參與細胞周期的調節，抑制細胞增殖，促進細胞終末分化，誘導細胞凋亡和參與細胞DNA損傷修復，對維持基因組的穩定發揮重要作用，而BRCA1基因的突變或缺失則導致基因組的不穩定性，繼而發生惡變，成為誘發卵巢癌的主要原因之一。因此，建立一種可行的、快速的、準確的卵巢癌早期檢測方法，對指導臨床上評估卵巢癌遺傳風險，卵巢癌的治療，改善卵巢癌預后的意義十分關鍵。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的不足，提供一種抗BRCA1單克隆抗體及其用途。

本發明利用BRCA1蛋白片段作為免疫原免疫BALB/c小鼠，利用細胞融合技術將免疫成功的小鼠脾臟淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞相融合篩選能夠穩定分泌抗BRCA1單克隆抗體的雜交瘤細胞株，大量生產BRCA1單克隆抗體，經純化后獲得高純度的抗BRCA1單克隆抗體，獲得的抗BRCA1單克隆抗體效價高、特異性好，可直接應用于分子免疫學研究，或制成多種體外診斷試劑盒用于檢測BRCA1抗原的免疫檢測工具中。可用于制備抗BRCA1的生物診斷試劑的研究與開發。

本發明的方案通過如下技術手段得以實現：

本發明所述抗BRCA1單克隆抗體，其重鏈可變區氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其輕鏈可變區序列氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

在某一具體實施方式中，本發明還具體公開了所述BRCA1單克隆抗體的制備方法，首先用BRCA1蛋白片段免疫BALB/c小鼠，再用免疫成功小鼠的脾臟淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，通過篩選陽性克隆得到特異性分泌抗BRCA1單克隆抗體雜交瘤細胞株，將該細胞接種于提前用液體石蠟致敏的BALB/c小鼠腹腔，大量生產抗BRCA1單克隆抗體，并通過蛋白純化的方式制備得到高純度的抗BRCA1單克隆抗體。

所述蛋白免疫為經過三次蛋白免疫；所述骨髓瘤細胞為SP2/0骨髓瘤細胞。

本發明還提供了一種能產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

本發明還提供所述的抗BRCA1單克隆抗體在制備免疫學檢測工具中的應用。

所述的抗BRCA1單克隆抗體在制備抗BRCA1的生物學檢測試劑中的用途。

進一步的所述的用途為制備用于檢測BRCA1蛋白抗原的試劑中的用途。