[發明專利]一種檢測新型冠狀病毒及流感病毒的試劑盒

有效

• 申請號: 202010135411.7
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111893211B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發明（設計）人: 高秀潔
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 深圳勝博時代專利代理事務所(普通合伙) 44506
• 代理人: 王成坤

本發明公開檢測新型冠狀病毒及流感病毒的試劑盒。特別是涉及基于重組酶和聚合酶的恒溫鏈置換聚合擴增技術，結合熒光基團標記的特異性性探針，實現對靶基因特異性的檢測；同時以人類基因GAPDH設計引物探針作為檢測內標，可有效監控樣品和擴增反應的有效性。發明包括引物探針特異性序列設計組合、檢測反應液A、檢測反應液B、陰性質控品、陽性質控品，應用本發明引物探針序列組以及試劑盒可在15分鐘內鑒別檢測核酸樣品中是否存在新型冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒三種病原體的一種或多種核酸。可應用于臨床疑似新型冠狀病毒感染者的快速篩查檢測、疾病預防控制系統的疫情監測，以及機場、車站、海關等區域疑似人員的快速篩查等多個領域。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，尤其是一種檢測新型冠狀病毒及流感病毒的試劑盒。

背景技術

新型冠狀病毒(2019-nCoV)屬于β屬冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或者橢圓形，常為多態性，直徑60-140nm。其基因特征與SARSr-CoV和MERSr-CoV有明顯區別。嚴重危害人民群眾的健康、生活，給我國醫療健康、經濟帶來極大損失。

一般針對病毒感染，常見檢測方法有基因檢測、免疫檢測、分離培養、基因組測序等技術手段和方法。新型冠狀病毒為新突發病原體，目前國家衛健委推薦的主要診斷手段和方法為常規實時熒光RT-PCR方法和全基因組測序法。已經有公司開發出IgM和IgG免疫學檢測方法和試劑。病毒培養均有準確、可靠性高的特點，但對于實驗室、人員操作的要求高，但對感染早期樣本，培養法陽性率低?；蚪M測序費用高，檢測周期1周，對于低載量樣本容易出現假陰性結果。

基于重組酶和聚合酶的恒溫鏈置換聚合擴增技術(Thermostatic Chainreplacement polymerization amplification，TCRPA)是一種將聚合酶鏈式反應的高效擴增特點與基于單鏈重組酶的恒溫擴增相結合的先進技術，而普通實時熒光PCR擴增反應獲得檢測結果需要60-100min。若將實時熒光TCRPA技術應用于快速檢測，將在短時間內判斷是否有感染新型冠狀病毒，從而便于疫情防控單位、臨床單位及時采取必要的防控和治療措施，對于防止交叉感染和提高診療效率、出入境檢驗檢疫、疫病監測防控等都意義重大。

發明內容

針對上述現有技術中存在的不足，本發明的目的在于提供一種檢測新型冠狀病毒及流感病毒的試劑盒。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種檢測新型冠狀病毒及流感病毒的試劑盒，包括特異性引物和探針組合物、檢測反應液A、檢測反應液B、陰性質控品和陽性質控品；

所述特異性引物和探針組合物由人類基因GAPDH特異性正反向引物、目標病原特異性正反向引物和不同熒光標記的特異性探針組成；

所述目標病原特異性正反向引物包括新型冠狀病毒特異性正反向引物、甲型流感病毒特異性正反向引物和乙型流感病毒特異性正反向引物；

所述特異性探針包括GAPDH特異性探針、新型冠狀病毒特異性探針、甲型流感病毒特異性探針和乙型流感病毒特異性探針；

所述人類基因GAPDH特異性正反向引物的序列分別為5’-GAGTGCTACATGGTGAGCCCCAAAGCTGGTG-3’和5’-GTGATGGGATTTCCATTGATGACAAGCTTCC-3’，所述GAPDH特異性探針的序列為5’-CACGTATTCCCCCAGGTTTACATGTTCCAA-Cy5-dT-THF-BHQ1-dT-GATTCCACCCATGG-3’；