[發(fā)明專利]白鮮皮中抗病毒活性部位、制備方法、含量測定方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010134725.5
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN111228354A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王磊;劉貴棟
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: A61K36/75
• 分類號: A61K36/75;A61P31/16;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;A61K125/00
• 代理公司: 南京燦爛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32356
• 代理人: 趙麗

1.一種白鮮皮抗病毒活性部位，其特征在于，該活性部位總檸檬苦素類含量為50％以上，并含有檸檬苦素、黃柏酮、梣酮、梣皮酮和前黃柏酮。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性部位，其特征在于，該活性部位總檸檬苦素類含量為80％以上，并含有檸檬苦素、黃柏酮、梣酮、梣皮酮和前黃柏酮。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的活性部位在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的活性部位，其特征在于，該活性部位在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述一種白鮮皮抗病毒活性部位的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)提取：取白鮮皮粉碎，加入6～10倍量石油醚，于70℃水浴回流提取2次，每次1h，合并濾液。過濾，藥渣加入6～10倍量二氯甲烷，于85℃水浴回流提取2次，每次1h，過濾，合并濾液。濃縮，得到濃縮浸膏。

(2)除雜：大孔樹脂柱層析，將上述提取所得濃縮浸膏用1:1～1:2的純水溶解后，進(jìn)行大孔樹脂吸附，然后先用1～5倍柱體積的純水洗脫除去水溶性雜質(zhì)；再用1～6倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)為60～80％的乙醇水溶液洗脫；收集體積分?jǐn)?shù)為60～80％的乙醇水溶液洗脫部位，濃縮干燥得大孔樹脂柱層析活性部位。

(3)純化：用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的洗脫液，分離條件：色譜柱為Agilent制備柱Zorba x SB-C18；21.2mm×250mm，流動相為甲醇-水溶液，進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下：0-30min，甲醇相從10％升為40％，40-60min，甲醇相從40％升為95％。流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用色譜級甲醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時間段5-15分鐘收集溶液，收集液濃縮干燥后得到白鮮皮抗病毒活性部位。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，除雜步驟中大孔樹脂柱型號可以是DH101、DM-130、AB-8。

7.一種白鮮皮中抗病毒活性部位的含量測定方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)供試品制備：精密稱取10.0mg白鮮皮中抗病毒活性部位，用色譜純甲醇溶解且定容至10ml容量瓶中，用0.45微米微孔濾膜過濾，即得到白鮮皮抗病毒活性部位供試品；

(2)：對照品溶液制備：精密稱定經(jīng)干燥過的檸檬苦素、黃柏酮、梣酮、梣皮酮和前黃柏酮對照品各5.0mg，置10mL的量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成白鮮皮檸檬苦素類混合對照品儲備液，-4℃冰箱放置，備用。

(3)：對步驟(1)制備的供試品進(jìn)行高效液相色譜測定，并以步驟(2)制備檸檬苦素、黃柏酮、梣酮、梣皮酮和前黃柏酮對照品進(jìn)行含量測定；HPLC條件為：色譜柱填料為AglientC18，規(guī)格為250mm×4.6mm 5μm，波長為210nm，流動相為甲醇-水溶液，梯度洗脫為：0-30min，甲醇相從10％升為65％，30-35min，甲醇相保持65％，35-40min，甲醇相從65％升為95％，40-60min，甲醇相95％等度洗脫；流速為1ml/min，柱溫為30℃。