[發明專利]一種高效表達重組貓干擾素ω2的哺乳動物細胞培養工藝

在審

• 申請號: 202010134705.8
• 申請日: 2020-03-02
• 公開（公告）號: CN113355286A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 代燕平;王雯茜;高小平;羅弟祥
• 申請（專利權）人: 成都彤琦恩生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12P21/02;C07K14/555
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高效表達重組貓干擾素-ω2(rFeIFN-ω2)的哺乳動物細胞培養工藝，其特征在于，所述培養工藝包含具體步驟如下：

(1)將常規制備的種子細胞接種至含無血清基礎培養基的生物反應器中進行懸浮培養；

(2)細胞接種密度為5-8×10⁵/mL，優選5×10⁵/mL；

(3)生物反應器中基礎培養基的工作體積為1-500L，轉速設置為10-200轉/分鐘，具體地，

7升生物反應器中培養基的工作體積為1-5L，優選3L工作體積；設置轉速100-200轉/分鐘，優選130轉/分鐘；

50升生物反應器中培養基的工作體積為10-40L，優選30L工作體積；設置轉速80-120轉/分鐘，優選90轉/分鐘；

250升生物反應器中培養基的工作體積為40-200L，優選150L工作體積；設置轉速10-80轉/分鐘，優選50轉/分鐘；

(4)初始培養細胞設置溫度為36℃-38℃，優選36.5℃；

(5)設置溶氧條件為30％-80％，優選40％；

(6)控制pH值在5-7.5范圍，優選6.8±0.5；

(7)于培養第3天補充3-10％的無血清補料培養基，優選5％，同時補加1-5mM的谷氨酰胺，優選2mM；培養過程中補充葡萄糖溶液使培養液中葡萄糖含量不低于2g/L，培養過程中控制細胞活率在70％以上；

(6)于培養第6天再次補充5％的無血清補料培養基，并將溫度調節至33℃繼續培養；

(7)于培養第8天再次補充5％的無血清補料培養基，保持溫度在33℃繼續培養；

(8)于培養第10天再次補充5％的無血清補料培養基，保持溫度在33℃繼續培養；

(9)于培養第12天再次補充3％的無血清補料培養基，保持溫度在33℃繼續培養。

2.根據權利要求1所述的一種高效表達rFeIFN-ω2的哺乳動物細胞培養工藝，其中，所述的哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢細胞，優選CHO DG44細胞。

3.根據權利要求1所述的細胞培養工藝，其中，所述的無血清基礎培養基，由濃度為10-30g/L的ActiPro培養基、濃度為10-20g/L的SFM4CHO培養基中的一種或幾種組成；另含添加物，由濃度為0.5-2g/L的F68、3～5g/L的葡萄糖、4～8mM谷氨酰胺中的一種或幾種組成，pH7-7.5。

4.根據權利要求1所述的細胞培養工藝，其特征在于，所述的無血清補料培養基，由濃度為100-200g/L的Cell Boost 7a、50-100g/L的Cell Boost 7b補料中的一種或幾種組成。