[發(fā)明專利]一種VEGF成像熒光探針及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010133658.5
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111407896A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 田蓓;田捷;杜洋;張璐;丁云鶴;陳燕云;郭學謙
• 申請（專利權）人: 首都醫(yī)科大學附屬北京同仁醫(yī)院;田蓓
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K39/395;A61P3/10;A61P27/02
• 代理公司: 天津睿勤專利代理事務所(普通合伙) 12225
• 代理人: 朱卉

本發(fā)明公開一種VEGF成像熒光探針的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：a.將雷珠單抗和過量熒光染料溶解到無水二甲基亞砜中，b.往步驟a中的溶液中加入過量三乙胺，在室溫避光條件下攪拌8?14小時，反應結束后將反應液冷凍干燥，獲得粗產(chǎn)物，c.粗產(chǎn)物經(jīng)分離純化，獲得VEGF成像熒光探針。本發(fā)明制備雷珠單抗結合熒光染料的熒光探針，實現(xiàn)在體糖尿病視網(wǎng)膜病變VEGF成像與定量分析，解決糖尿病視網(wǎng)膜病變活體、靶向成像及其量化分析等問題，建立糖尿病視網(wǎng)膜病變與VEGF之間的關聯(lián)模型，從而總結VEGF的影像學監(jiān)測指標，以便實現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變早期診斷、早期干預，實現(xiàn)精準治療。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，特別涉及一種VEGF成像熒光探針及其制備方法。

背景技術

糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)是我國目前最主要的致盲性疾病。國內(nèi)外治療DR最重要的階段是從重度非增生期到增生期轉化時，治療的重要靶點是抗新生血管生長因子(VEGF)。此前的糖尿病視網(wǎng)膜病變治療則以觀察為主。在重度非增生期糖尿病視網(wǎng)膜病變(NPDR)這一時期及時準確介入臨床治療可以使DR至少50％以上避免致盲。然而，在NPDR這一時期是否向增生期發(fā)展臨床上目前僅是進行熒光素鈉血管造影和眼底鏡定期檢查，此種方法無法做到早期檢測到關鍵致病靶點VEGF的濃度，也無法定量監(jiān)測。一旦發(fā)現(xiàn)血管滲漏新生血管形成進入增生期，往往VEGF濃度已很高，病情控制難度很大。如果能夠定量檢測VEGF這一重要靶點則有助于早期鑒別、診斷和干預糖尿病視網(wǎng)膜病變由非增生期向增生期發(fā)展，避免病情惡化、改善或保持視功能，降低糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的致盲率。

近年來，分子影像技術作為新近的影像檢查手段引起了廣泛的關注。這些檢查手段被應用于臨床影像檢查和手術導航。與其他影像檢查方法相比，分子影像手段可以顯示組織水平、細胞和亞細胞水平的特定分子，反映活體狀態(tài)下分子水平變化，對其生物學行為在影像方面進行定性和定量的研究；在尚無解剖改變的疾病前檢出異常，為探索疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉歸，評價藥物的療效中，起到連接分子生物學與臨床醫(yī)學之間的橋梁作用。它將生物化學與新的成像探針進行綜合，由精密的成像技術來檢測，再通過一系列的圖像后處理技術，達到顯示活體組織在分子和細胞水平上的生物學過程的目的。

目前熒光成像技術由于其高靈敏度、無創(chuàng)檢測和高選擇性，已經(jīng)成為檢測生物微環(huán)境的有力工具。因此，發(fā)展一種新的熒光探針檢測血管內(nèi)皮生長因子對于糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)展到增生期的診斷提供了重要的指導信息，從而指導臨床精準治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中存在的技術問題，提供一種VEGF成像熒光探針及其制備方法，制備雷珠單抗結合熒光染料的熒光探針，實現(xiàn)在體糖尿病視網(wǎng)膜病變VEGF成像與定量分析，解決糖尿病視網(wǎng)膜病變活體、靶向成像及其量化分析等問題，建立糖尿病視網(wǎng)膜病變與VEGF之間的關聯(lián)模型，從而總結VEGF的影像學監(jiān)測指標，以便實現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變早期診斷、早期干預，實現(xiàn)精準治療。

本發(fā)明采用的技術方案是：一種VEGF成像熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

a.將雷珠單抗和過量熒光染料溶解到無水二甲基亞砜中，

b.往步驟a中的溶液中加入過量三乙胺，在室溫避光條件下攪拌8-14小時，反應結束后將反應液冷凍干燥，獲得粗產(chǎn)物，

c.粗產(chǎn)物經(jīng)分離純化，獲得VEGF成像熒光探針。

作為優(yōu)選，所述熒光染料采用488nm波段可激發(fā)的異硫氰酸熒光素。

作為優(yōu)選，步驟a.過量熒光染料溶解到無水二甲基亞砜中；雷珠單抗加入到磷酸緩沖鹽溶液中，純化；熒光染料溶液加入到純化后的雷珠單抗溶液中。

作為優(yōu)選，步驟c使用高效液相色譜分離純化。