[發明專利]一種細胞外ABL1激酶活性檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010133489.5
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111321200A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 費嘉;陰釗
• 申請（專利權）人: 廣州安鏑聲生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明公開了一種細胞外ABL1激酶活性檢測試劑盒，包括以下試劑：ATP、ABL1底物多肽、反應緩沖液，以及ABL1蛋白或ABL1激酶結構域(PTK)對應的多肽片段。本發明ABL1激酶活性檢測試劑盒操作簡便、有效，可以在細胞外高通量地檢測ABL1激酶的活性，從而用于大規模地篩選ABL1激酶活性的抑制劑。

技術領域

本發明涉及酶活性檢測技術領域，尤其是一種細胞外ABL1激酶活性檢測試劑盒。

背景技術

非受體酪氨酸激酶ABL1廣泛存在于哺乳動物各種組織細胞中，通過介導底物蛋白發生酪氨酸磷酸化修飾，參與細胞增殖、細胞周期、細胞凋亡、DNA損傷修復、炎癥反應、腫瘤發生形成等生命過程的調控。在正常生理條件下，ABL1的激酶活性受到嚴謹調控，被多種細胞因子、氧化應激或DNA損傷應激激活后的ABL1激酶活性大大提高，通過定位于不同的細胞亞結構發揮不同的生理功能。BCR-ABL融合蛋白在細胞信號轉導以及轉化過程中通過不斷磷酸化和活化下游底物，促使各階段粒細胞無限增殖和遷移，最終導致細胞生長失控，引發白血病。以它作為靶點來進行研究，使靶向治療CML(慢性髓性白血病)顯得非常有意義。

ABL蛋白是由幾個結構域共同組成的一個非受體型酪氨酸激酶，它包括N端結構域(NCap)、SH2結構域、SH3結構域、一段連接序列和C末端的激酶結構域(PTK)，正是其中這段激酶結構域使得ABL蛋白具有酪氨酸激酶的活性。完整的ABL1蛋白較大，表達較為困難。

患者體內ABL1蛋白發生的一些突變使得CML的治療變得有些困難。目前已開發出一些基于ABL1蛋白的抑制劑，包括伊馬替尼(imatinib)，尼洛替尼(nilotinib)，博舒替尼(bosutinib)等，均對ABL1蛋白有很好的抑制作用，但由于蛋白一些位點的突變，使得部分患者產生耐受現象。另一方面，在體內的研究中往往周期長，而且體內生物環境的復雜性也為ABL1抑制劑的研發設置了巨大的阻礙。

發明內容

基于上述問題，本發明提供了一種細胞外ABL1激酶活性檢測試劑盒，其可以用于高通量、大規模地篩選ABL1激酶的活性抑制劑。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案為：

一種細胞外ABL1激酶活性檢測試劑盒，包括以下試劑：ATP、ABL1底物多肽、反應緩沖液，以及ABL1蛋白或ABL1激酶結構域(PTK)對應的多肽片段。

作為上述方案的進一步優化，所述ABL1底物多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作為上述方案的進一步優化，所述ABL1激酶結構域對應的多肽片段為PTK的全部或部分。需要說明的是，ABL蛋白是由幾個結構域共同組成的一個非受體型酪氨酸激酶，它包括N端結構域(NCap)、SH2結構域、SH3結構域、一段連接序列和C末端的激酶結構域(PTK)，其中正是這段激酶結構域(PTK)使得ABL蛋白具有酪氨酸激酶的活性，由于ABL1整個蛋白較大，表達較為困難，因此，本發明的檢測試劑盒可以選擇PTK結構域相應的多肽，但是不限于PTK結構域相應的多肽，還可以選擇包括PTK結構域以及其相鄰的結構域的多肽片段，或者是整個ABL1蛋白。

作為上述方案的進一步優化，所述ABL1激酶結構域對應的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。需要說明的是，本發明經多次實驗證實，采用如SEQ ID NO.2或3所示的多肽用于篩選ABL1激酶的活性抑制劑都是有效的。

作為上述方案的進一步優化，所述ABL1激酶結構域對應的多肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。需要說明的是，本發明的試劑盒可以選擇SEQ ID NO.2所示的多肽，或SEQ ID NO.3所示的多肽，還可以同時選擇SEQ ID NO.2和3所示的多肽。

作為上述方案的進一步優化，所述反應緩沖液包括HEPES、MgCl₂、DTT和BSA。