[發(fā)明專利]一種陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010131680.6
• 申請日: 2020-02-29
• 公開（公告）號: CN111208288A
• 公開（公告）日: 2020-05-29
• 發(fā)明（設計）人: 李萬壽
• 申請（專利權）人: 濟南德亨醫(yī)學科技有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測方法，采用量子點偶聯陰道毛滴蟲抗體，實現了對陰道毛滴蟲的特異性檢測，大大提高了陰道毛滴蟲檢出率、準確率；示蹤物量子點具有激發(fā)光譜寬、發(fā)射光譜窄的特點，可實現在熒光顯微鏡下直接觀察，降低了對檢測人員的操作技能及實驗室檢測儀器的要求；同時量子點熒光效率高，熒光強度強，穩(wěn)定性好，抗漂白能力強，可經受多次，激發(fā)而不易發(fā)生熒光淬滅，即已染色的標本可以長期保存，可疑結果可以多次閱片。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物領域，具體是一種陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測方法。

背景技術

陰道毛滴蟲是寄生在人體陰道和泌尿道的鞭毛蟲，主要引起滴蟲性陰道炎和尿道炎，是以性傳播為主的一種傳染病。毛滴蟲不但寄生于缺氧的陰道內，并可侵入尿道和尿道旁腺，甚至于上行至輸尿管及腎盂。最適宜于毛滴蟲生長的pH值是5.5～6，如pH為5以下或7.5以上則毛滴蟲的生長會受到抑制，毛滴蟲可引起陰道滴蟲病 ，主要檢測方法為 懸滴法、涂片染色法、培養(yǎng)法等。

目前臨床常用的陰道毛滴蟲檢測方法有懸滴法、吖啶橙熒光染色法、陰道毛滴蟲分離培養(yǎng)法等，以上方法陽性率低、耗時、不易檢出，臨床使用不方便。因此，有必要提供一種高特異性、高靈敏度的陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測技術，以期解決現有技術中的不足。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種陰道毛滴蟲量子點熒光免疫檢測方法，包括陰道毛滴蟲量子點熒光探針的制備方法及使用方法：

一種陰道毛滴蟲量子點熒光探針的制備方法，包括如下步驟：

（1）采用EDC偶聯法標記抗體，將量子點溶液和EDC溶液按照按1:10比例混合，并常溫避光攪拌活化之；

（2）加入過量陰道毛滴蟲標記抗體，調整反應pH值為6，避光反應1小時；

（3）將反應液進行超濾，在10000rpm下離心20分鐘，吸出超濾后的標記抗體，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液復溶至原體積，即為制備好的量子點標記抗體。

一種陰道毛滴蟲量子點熒光探針的使用方法，包括如下步驟：

（1）挑取樣本在載玻片上制成涂片，用無水乙醇固定；

（2）將載玻片標本放于水平位置，加10ul制備好的量子點標記抗體完全覆于標本上；

（3）置溫育盒37℃孵育30分鐘，蒸餾水緩緩全覆蓋洗滌3遍；

（4）用熒光顯微鏡100倍油鏡下觀察。

作為本發(fā)明進一步的方案：一種陰道毛滴蟲量子點熒光探針的制備方法，包括如下步驟：

（1）采用EDC偶聯法標記抗體，將量子點溶液和EDC溶液按照按3:20比例混合，并常溫避光攪拌活化之；

（2）加入過量陰道毛滴蟲標記抗體，調整反應pH值為7，避光反應1小時；

（3）將反應液進行超濾，在10000rpm下離心20分鐘，吸出超濾后的標記抗體，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.0的溶液復溶至原體積，即為制備好的量子點標記抗體。

作為本發(fā)明進一步的方案：一種陰道毛滴蟲量子點熒光探針的制備方法，包括如下步驟：

（1）采用EDC偶聯法標記抗體，將量子點溶液和EDC溶液按照按1:5比例混合，并常溫避光攪拌活化之；

（2）加入過量陰道毛滴蟲標記抗體，調整反應pH值為8，避光反應1小時；