[發(fā)明專利]一種皮膚修復(fù)液及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010131539.6
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111166770A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蒲磊;李亞雄;楊應(yīng)南;劉博宇;張靜;孟平;張雅永;韓燊
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明市延安醫(yī)院
• 主分類號: A61K35/51
• 分類號: A61K35/51;A61P17/00;A61P17/02;C12N5/0775
• 代理公司: 昆明合盛知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53210
• 代理人: 龍燕

本發(fā)明公開了一種皮膚修復(fù)液及其制備方法，屬于皮膚修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的條件性培養(yǎng)液。同直接將間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用于治療皮膚傷口相比，本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液避免了與移植活細(xì)胞和細(xì)胞增殖相關(guān)的安全問題，如免疫相容性、致瘤性、傳染性疾病的傳播；且條件性培養(yǎng)基中的成分可采用類似于評估傳統(tǒng)藥物的方法來評估其安全性、劑量和效力；本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液的生產(chǎn)和制造更加容易，并且可以通過冷凍干燥保存，易于包裝和運(yùn)輸，治療前無需耗時復(fù)蘇及擴(kuò)增干細(xì)胞等，便于使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種皮膚修復(fù)液及其制備方法，屬于皮膚傷口修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

皮膚作為機(jī)體主要的防護(hù)屏障，形態(tài)和功能完整的皮膚可以有效減少甚至避免有害理化因素對機(jī)體的損傷。皮膚創(chuàng)傷是一個日益嚴(yán)重的問題，已成為很大的健康和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，由于燒傷、創(chuàng)傷、手術(shù)、輻射損傷、糖尿病等因素導(dǎo)致的皮膚創(chuàng)傷是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)面臨的一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。若皮膚創(chuàng)傷則容易發(fā)生感染，若形成慢性難愈創(chuàng)明將嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量。因此，皮膚創(chuàng)傷必須得到快速而有效的治療。目前治療皮膚創(chuàng)傷的方法及手段有很多，但取得的療效并不盡如人意。

缺損局部的細(xì)胞增殖和遷移在的皮膚愈合過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，皮膚創(chuàng)傷局部的細(xì)胞增殖受限和遷移受損是導(dǎo)致傷口延遲愈合甚至不愈合的重要原因。研究顯示，間充質(zhì)干細(xì)胞具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、促血管生成和抗炎癥的作用，間充質(zhì)干細(xì)胞的旁分泌作用是其發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的主要途徑，現(xiàn)有方法均是直接將干細(xì)胞應(yīng)用于治療皮膚創(chuàng)傷，存在免疫相容性、致瘤性、傳染性疾病的傳播，長時間儲存活細(xì)胞需要加入具有潛在毒性的冷凍保存劑。由此可見直接將干細(xì)胞應(yīng)用于治療皮膚創(chuàng)傷存在很大的局限性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種皮膚修復(fù)液，所述皮膚修復(fù)液為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的條件性培養(yǎng)液。

本發(fā)明的另一目的在于提供所述皮膚修復(fù)液的制備方法，具體包括以下步驟：

(1)在二氧化碳培養(yǎng)箱中應(yīng)用培養(yǎng)瓶培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，使其密度達(dá)到90-95％。

(2)用α-MEM培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞后加入新的α-MEM培養(yǎng)基，繼續(xù)在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)48h～96h后獲取培養(yǎng)瓶中的上清液。

(3)將收集得到的上清液分別倒入超濾離心管離心，經(jīng)濾膜過濾后得到臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的條件性培養(yǎng)液，置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

優(yōu)選的，本發(fā)明步驟(1)中培養(yǎng)瓶為T-175培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基為α-MEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為：溫度37℃，二氧化碳濃度為5％，飽和濕度。

優(yōu)選的，本發(fā)明步驟(2)中α-MEM培養(yǎng)基的加入量為40-45ml，培養(yǎng)條件為：溫度37℃，二氧化碳濃度為5％，飽和濕度。

本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液的使用方法：局部涂抹，3次/日，每次用量：100μL/1cm²創(chuàng)面。

本發(fā)明的有益效果：

(1)直接將干細(xì)胞應(yīng)用于治療皮膚傷口相比，本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液避免了與移植活細(xì)胞和細(xì)胞增殖相關(guān)的安全問題，如免疫相容性、致瘤性、傳染性疾病的傳播；且條件性培養(yǎng)基中的成分可采用類似于評估傳統(tǒng)藥物的方法來評估其安全性、劑量和效力。

(2)長時間儲存活細(xì)胞需要加入具有潛在毒性的冷凍保存劑，而長時間儲存本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液則避免了冷凍保存劑的使用，同時不易喪失其治療效果。條件性培養(yǎng)基中的成分可采用類似于評估傳統(tǒng)藥物的方法來評估其安全性、劑量和效力。

(3)本發(fā)明所述皮膚修復(fù)液能夠避免侵入性的細(xì)胞采集過程，因此對于治療疾病來說更經(jīng)濟(jì)、更實(shí)用；能夠在可控的實(shí)驗(yàn)室條件下通過指定的細(xì)胞系進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)；