[發明專利]一種適于拭子樣品的高速高靈敏核酸檢測盒及方法有效
| 申請號： | 202010130612.8 | 申請日： | 2020-02-28 |
| 公開（公告）號： | CN111394510B | 公開（公告）日： | 2023-04-18 |
| 發明（設計）人： | 王繼國;陳普;李振海 | 申請（專利權）人： | 天羅診斷科技江蘇有限公司;天篩（上海）科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12M1/26;C12M1/24;C12M1/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海領匠知識產權代理有限公司 31404 | 代理人： | 李華 |
| 地址： | 226400 江蘇省南通市如東*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 適于 樣品 高速 靈敏 核酸 檢測 方法 | ||
1.一種適于拭子樣品的高速高靈敏核酸檢測盒，其包含病毒裂解反應液和引物探針酶預混液，其特征在于所述病毒裂解反應液分A和B兩類，病毒裂解反應液A適用于RNA病毒PCR雙酶一步法，病毒裂解反應液B適用于DNA/RNA病毒PCR單酶一步法，其特征在于所述病毒裂解反應液A，其由下列組分組成：100mM?pH8.0-8.8的Tris緩沖液，100mM氯化鉀，100mM醋酸鉀，2.5mM鎂離子，25mM硫酸銨，0.2M海藻糖，8％體積比的甘油，0.02％的吐溫20或曲拉通-100；或
所述病毒裂解反應液B，其由下列組分組成：115mM?pH8.0-8.8的Tricine或Bicine緩沖液，100mM氯化鉀，100mM醋酸鉀，0.2M海藻糖，8％體積比的甘油，0.02％體積比的吐溫20或曲拉通-100；
所述引物探針預混液含熱啟動PCR酶，所述熱啟動PCR酶為5G聚合酶、TTX聚合酶或Hawk?fast?Z05；
核酸檢測時，含樣品的所述病毒裂解反應液與引物探針酶預混液的加樣體積比為4:1。
2.如權利要求1所述的高速高靈敏核酸檢測盒，其特征在于檢測樣品為RNA病毒時，所述引物探針酶預混液含5-200U抗抑制的高溫逆轉錄酶；2-10U抗抑制的熱啟動PCR酶；10-100U?RNA酶抑制劑；0.5-5mM?DTT；2-4uM?dNTP；0-100U的UNG酶；0.1uM-10uM的引物和探針混合物。
3.如權利要求1所述的高速高靈敏核酸檢測盒，其特征在于檢測樣品為DNA病毒時，所述引物探針酶預混液含2-10U抗抑制的熱啟動PCR酶；2-4uM?dNTP；0-100U的UNG酶；0.1uM-10uM的引物和探針混合物。
4.如權利要求1所述的高速高靈敏核酸檢測盒，其特征在于檢測樣品為RNA病毒時，所述引物探針酶預混液含2-10U抗抑制的熱啟動PCR酶；10-100U?RNA酶抑制劑；0.5-5mM?DTT；2-4uM?dNTP；0-100U?UNG酶；0.1uM-10uM的引物和探針混合物。
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