[發(fā)明專利]一種冠突散囊菌株及其發(fā)酵液提取物的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010129486.4
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111235038A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒先偉;李倩;陳本科;蔡旭
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市清生元生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P1/02;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種冠突散囊菌株，冠突散囊菌株（Eurotium cristatum）116于2019年11月1日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCC No.18826；同時還公開了一種發(fā)酵液提取物的制備方法，該方法包括菌種活化、種子液制備、一級發(fā)酵、二級發(fā)酵、超聲輔助提取、離心處理、微濾、濃縮、噴霧干燥或冷凍干燥等步驟，本發(fā)明優(yōu)化了冠突散囊菌株發(fā)酵液提取物的制備工藝，其提取純度更高，所制取發(fā)酵液提取物提高免疫力的效果更加明顯，為進一步研究提高免疫力的藥物、食品或保健食品提供了依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的說涉及一種冠突散囊菌株及其發(fā)酵液提取物的制備方法。

背景技術(shù)

“金花菌”，即冠突散囊菌，是茯磚茶生產(chǎn)的優(yōu)勢菌，在茯磚茶上長有大量金黃色顆粒，俗稱“金花”。“金花”是茯磚茶獨特風味的主要影響因素，長年飲用茯磚茶有調(diào)理腸胃、促進消化、降血糖、降血脂、增強人體體質(zhì)及延緩衰老等功效，而這些功效與“金花菌”的作用是密不可分的。冠突散囊菌的發(fā)酵液提取物同樣具備抗氧化、抑菌、抑制乙酰膽堿脂酶活性作用、肉制品保鮮功能及提高免疫力作用，但是目前冠突散囊菌發(fā)酵液提取物的制備工藝太過粗糙，其提取純度較低，如中國專利申請：201710010631.5，所提取得到的發(fā)酵液提取物功效較差，無法滿足提高免疫力的藥物、食品或保健食品功效的高要求。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供了一種冠突散囊菌株及其發(fā)酵液提取物的制備方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下方案來實現(xiàn)：一種冠突散囊菌株（Eurotium cristatum）116，該菌株已于2019年11月1日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCC No.18826。

本發(fā)明的一種冠突散囊菌株發(fā)酵液提取物，該發(fā)酵液提取物以冠突散囊菌株116為菌種，通過以下步驟制備而成：

（1）菌種活化：挑取冠突散囊菌株菌絲接種于PDA平板上，25℃培養(yǎng)5天，連續(xù)活化2次；

（2）種子液制備：在去離子水中加入PDB、KH₂PO₄ 、MgSO₄·7H₂O、維生素B₁充分攪拌溶解，pH自然，配置得到PDB 24.0 g/L，KH₂PO₄ 3.0 g/L，MgSO₄·7H₂O 1.5 g/L，維生素B₁ 10.0mg/L的種子培養(yǎng)液；

從步驟1中PDA平板上取5個0.5 cm²大小菌塊連同培養(yǎng)基分別接種到含有250 ml種子培養(yǎng)基的500 ml三角瓶中，在恒溫震蕩培養(yǎng)箱上培養(yǎng)5天（培養(yǎng)溫度為25℃，轉(zhuǎn)速150 rpm）；

（3）一級發(fā)酵：制備7.0L發(fā)酵培養(yǎng)基置于10L一級發(fā)酵罐中，121℃高壓原位滅菌后冷卻后備用；將步驟2中制備的冠突散囊菌株種子液在火焰保護法下接種于10L一級發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1-10%；接種后，在溫度24-30℃，轉(zhuǎn)速60-250rpm，通氣量0.1-4 m³/h，罐壓0.01-0.06MPa條件下發(fā)酵3-20天，得到冠突散囊菌株一級發(fā)酵液；

（4）二級發(fā)酵：制備70L發(fā)酵培養(yǎng)基置于100L二級發(fā)酵罐中，121℃高壓原位滅菌后冷卻后備用；將步驟3中制備的冠突散囊菌株一級發(fā)酵液移種至100L二級發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為1-10%；接種后，在溫度24-30℃，轉(zhuǎn)速60-250rpm，通氣量0.3-5m³/h，罐壓0.01-0.06MPa條件下發(fā)酵4-35天，得到冠突散囊菌株二級發(fā)酵液；