[發明專利]同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法

有效

• 申請號: 202010129295.8
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111239292B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 丁芬
• 申請（專利權）人: 丁芬
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

1.同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：包括如下步驟：

對血清樣品進行前處理，前處理方法為：向血清樣品中加入1,4-二硫蘇糖醇，混勻后，再加入蛋白沉淀劑進行處理；

從前處理后的血清樣品中萃取脂溶性維生素和同型半胱氨酸；

將萃取液經過吹干、復溶后，上液相色譜質譜聯用系統進行進樣分析；

所述萃取劑為正己烷；

其中，液相色譜流動相：A：0.1％甲酸+水；B:0.1％甲酸+乙腈+異丙醇，乙腈和異丙醇的體積比為2-3:10-15，液相色譜的梯度洗脫程序為：0-0.4min，流動相A的體積百分數一直為60％；0.4-1.5min，流動相A的體積百分數由60％逐漸降為40％；1.5-2.5min，流動相A的體積百分數由40％逐漸降為0；2.5-4.5min，流動相A的體積百分數一直為0；4.5-4.51min，流動相A的體積百分數升至60％；4.51-5.0min，流動相A的體積百分數一直為60％；

所述多種脂溶性維生素為：維生素A、25OH-VD2、25OH-VD3、維生素E、維生素K；

液相色譜檢測條件為：Phenomenex Kintex C18，30*3mm，2.6μm；流速：0.7ml/min；柱溫：40℃；

質譜條件：

離子源：APCI源；NC:5.0；TEM:450；CAD:6；CUR:25；GS1:50；

質譜離子對，如下表 所示；

數據采集方式：多反應監測模式MRM；

霧化氣溫度：450℃；

霧化氣氣流：5.0L/min；

毛細管電壓：4500V；

離子源：大氣壓電離源APCI；

離子模式：正離子模式。

2.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：1,4-二硫蘇糖醇溶液的濃度為70-120μg/ml。

3.根據權利要求2所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述1,4-二硫蘇糖醇的濃度為100μg/ml。

4.根據權利要求2所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：血清樣品與1,4-二硫蘇糖醇溶液的體積比為3.5-4.5:1。

5.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述蛋白沉淀劑為甲醇和水的混合液，其中，水的質量百分數為1％-10％。

6.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：蛋白沉淀劑中，水的質量百分數為2％。

7.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：血清與蛋白沉淀劑的體積比為1:1.2-2。

8.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：采用氮氣將萃取液吹干。

9.根據權利要求1所述的同時檢測多種脂溶性維生素和同型半胱氨酸的方法，其特征在于：所述復溶的復溶劑為95％甲醇水溶液。