[發明專利]一種次氯酸根熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 202010128712.7
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111233880B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 韓志湘;董良歡;孫帆;龍凌亮;姜舒;代曉婷;張敏
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07D491/16
• 分類號: C07D491/16;C09K11/06;G01N21/64;A61K49/00
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本發明屬于熒光探針技術領域，具體涉及一種次氯酸根熒光探針的制備方法。本發明提供了以8?羥基久洛尼定?9?醛為起始原料，通過生成的香豆素343酰氯與2,4?二硝基苯肼在三乙胺作用下合成該熒光探針的制備方法；該熒光探針是一種具有極低背景熒光、高靈敏的次氯酸根熒光探針，能選擇性識別次氯酸根，且隨著次氯酸根的濃度增加，其熒光強度在488nm逐漸增強；該探針具備靈敏、快速識別的功能；本發明制備的熒光探針可用于實際水樣中次氯酸根含量的檢測、活細胞外源性/內源性次氯酸根檢測以及斑馬魚體內次氯酸根的檢測。

技術領域

本發明屬于熒光探針技術領域，具體涉及一種次氯酸根熒光探針的制備方法及其應用。

背景技術

次氯酸根(ClO^-)是一種常見的活性氧(ROS)，已在我們的日常生活中廣泛用作消毒劑和家用漂白劑。通常，其濃度范圍為10-10⁴μM。然而，暴露于水中高水平的ClO^-殘留物可能會引起眼睛，鼻子刺激和胃部不適，從而對人體健康造成嚴重的不利影響。另一方面，在髓過氧化物酶(MPO)的催化下，雙氧水(H₂O₂)與氯離子(Cl^-)的反應可在生物體內產生ClO^-。它在人類免疫系統和維持細胞內氧化還原穩態中起著重要作用。但是，人體內ClO^-濃度的失衡通常會導致與氧化應激損害相關的疾病，例如心血管疾病、肺損傷、類風濕性關節炎等疾病。因此，迫切需要構建檢測水樣品和生物樣品中的ClO^-的有效方法。

近年來，已經開發出多種檢測ClO^-的方法，包括分光光度法、比色法、化學發光法、電化學分析和熒光探針等。與其它檢測方法相比，熒光探針因其高選擇性、高靈敏度、操作簡便以及以非侵入性方式檢測的性質而備受關注?；诖温人岣膹娧趸裕藗冊O計了含有酰肼、硫、腙、肟、對甲氧基苯酚及碳碳雙鍵等識別基團的熒光探針。這些熒光探針表現出了很好的分析性能，但存在探針分子自身熒光背景較高的問題。而在實際應用中，高背景熒光信號往往會降低檢測靈敏度，甚至導致假陽性結果。為了獲得準確和可靠的檢測，非常需要研制具有極低背景熒光的ClO^-熒光探針。

發明內容

根據所提出的要求，本發明人對此做了大量的文獻調研和深入研究，提供了一種極低背景熒光的高靈敏次氯酸根熒光探針。

本發明的技術方案是，一種次氯酸根熒光探針，其分子結構如下：

具體合成按照下述步驟進行：

(1)中間體化合物香豆素343的合成：將等當量的8-羥基久洛尼定-9-醛和丙二酸環異丙酯(麥氏酸)溶于乙醇，再將0.1當量的哌啶和乙酸逐滴滴入上述溶液；常溫攪拌后，加熱回流；冷卻后倒入冰水中，抽濾，得到濾餅，用二氯甲烷、甲醇和乙酸為淋洗劑進行硅膠柱柱層析純化，得到黃色固體，即為香豆素343；

(2)熒光探針分子LH-1的合成：將步驟(1)得到的香豆素343溶于二氯甲烷，冰浴下逐滴滴入20當量的草酰氯，然后再滴入N,N-二甲酰胺(簡稱DMF)，在室溫條件下進行第一次攪拌，旋除溶劑，真空干燥得到干燥的產物；

將上述所得產物溶于無水二氯甲烷中，分批加入等當量的2,4-二硝基苯肼，逐滴滴入20當量的無水三乙胺，在室溫條件下進行第二次攪拌，旋除溶劑，得到粗產物，用淋洗劑進行硅膠柱柱層析純化，得到黃色固體，為探針分子化合物LH-1；即為本發明所要制備的次氯酸根熒光探針。

優選的，步驟(1)中所述8-羥基久洛尼定-9-醛、丙二酸環異丙酯、乙醇、哌啶和乙酸的用量關系為1.12g：0.74g：8mL：0.044g：0.1～0.2mL。

優選的，步驟(1)中所述乙醇和冰水的體積比為8：100。

優選的，步驟(1)中所述常溫攪拌的時間為30～40min，加熱回流的時間為3h。