[發明專利]一種基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP-3的試劑盒及其制備使用方法

在審

• 申請號: 202010128346.5
• 申請日: 2020-02-28
• 公開（公告）號: CN111856009A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 芮雙印;任傳伍
• 申請（專利權）人: 安徽大千生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 合肥興東知識產權代理有限公司 34148
• 代理人: 王偉

本發明提供了一種基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP?3的試劑盒，包括反應緩沖液R1和膠乳試劑R2；反應緩沖液R1包括緩沖液、無機鹽、增濁劑、防腐劑、穩定劑、表面活性劑；膠乳試劑R2包括至少兩種通過MMP?3與膠乳微球偶聯而成的膠乳試劑組成液，每種組成液之間的混合比例為1:1；此外，每種膠乳試劑組成液還分別包括膠乳保存液以及保存在膠乳保存液中的膠乳微球，膠乳保存液包括緩沖液、無機鹽、穩定劑、防腐劑、表面活性劑。本發明還提供了一種基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP?3的試劑盒的制備使用方法。本發明試劑盒線性范圍可達到1600ng/mL，并且具有很好的靈敏度、特異性及準確度，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物檢測試劑制備領域，尤其涉及一種基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP-3的試劑盒及其制備使用方法。

背景技術

基質金屬蛋白酶3(MMP-3)是由關節滑膜細胞、纖維母細胞、巨噬細胞等產生的一種蛋白質分解酶。MMP-3因可分解蛋白多糖、各種膠原蛋白、層粘連蛋白、纖連蛋白而被認為與關節破壞有著密切的關系。在風濕性關節炎患者的滑膜組織中發現MMP-3過剩表達，患者血液中的濃度可反映其風濕性關節炎的活動性。

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以對稱性、多關節炎癥為主要表現的慢性、全身性自身免疫性疾病。RA的靶器官主要是關節滑膜，病理改變是慢性滑膜炎，出現滑膜炎癥、增厚、血管翳形成、軟骨及軟骨下骨質破壞，終導致關節畸形及強直而致殘。其中，軟骨和骨的進行性、不可逆性破壞是一個不可忽視的特點，造成RA關節破壞的發病機制目前尚未完全闡明。新近研究表明，基質金屬蛋白酶3(matrixmetalloproteinase-3，MMP-3)的高表達及在滑膜、軟骨和軟骨下骨的細胞外間質的降解中均發揮著重要作用。

2000年左右，國際醫學界研究發現，RA增生的滑膜細胞及軟骨細胞在多種細胞因子激活下分泌產生的基質降解酶(如基質金屬蛋白酶、組織蛋白酶)是軟骨降解、破壞的重要原因之一。MMP-3是RA早期疾病活動的一個重要預測因子，是導致軟骨降解的最重要的蛋白酶，是系統性的炎癥標志物，可作為類風濕關節炎患者滑膜損害和預后的指標。

首先實現MMP-3濃度測定的是酶聯免疫法，將具有免疫活性的MMP-3單抗結合到固相載體表面，利用具有抗體免疫活性、同時也具有酶活性的酶標抗體，與結合在固相載體表面的MMP-3單抗結合，加底物后，酶標抗體的酶催化底物成為有色產物，結合在固相載體上的酶量與標本中MMP-3的量成一定的比例，產物的量與標本中MMP-3的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺對 MMP-3進行定量。但該法對儀器條件要求高，常規應用有困難，也不適用自動化檢測。基于分光光度計檢測的生化試劑盒的研發也受到各國體外診斷試劑企業關注。免疫比濁法是抗原抗體結合動態測定方法，其基本原理是：樣本加入到試劑中以后，其中的MMP-3和試劑中包被了抗人MMP-3抗體的膠乳顆粒發生抗原-抗體的特異性結合反應，產生渾濁現象，其濁度與樣本中MMP-3濃度成正比。使用光學方法測定濁度，便可計算出樣本中MMP-3濃度。然而，目前的基于免疫比濁法的的MMP-3測定試劑盒在線性范圍、靈敏度、特異性與準確度上仍表現出了一定的不足，不能完全滿足臨床需求。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于提供一種線性范圍寬、靈敏度特異性好、準確度高的基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP-3的試劑盒及其制備使用方法。

本發明采用以下技術方案解決上述技術問題：

一種基于膠乳增強免疫比濁法測定MMP-3的試劑盒，包括反應緩沖液R1 和膠乳試劑R2；

所述反應緩沖液R1包括的成分及相應含量為：緩沖液5-10g/L，無機鹽6-17 g/L，增濁劑10-30g/L，防腐劑1-3mL/L，穩定劑20-35g/L，表面活性劑0.5-2.5 mL/L，溶劑為純化水；