[發(fā)明專利]一種區(qū)分檢測(cè)半胱氨酸的試劑及其合成方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010125872.6
• 申請(qǐng)日: 2020-02-27
• 公開（公告）號(hào): CN111303072A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陰彩霞;任海仙;霍方俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D277/66
• 分類號(hào): C07D277/66;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 張福增

本發(fā)明提供了一種區(qū)分檢測(cè)半胱氨酸的試劑及其合成方法和應(yīng)用，所述試劑是一種苯并噻唑類衍生物：所述衍生物的中文名稱為(E)?2?(苯并噻唑?2?基)?6?(2?(3?(二氰基亞甲基)?5,5?二甲基環(huán)己?1?烯?1?基)乙烯基)?4?甲基苯基丙烯酸酯，英文名稱為(E)?2?(benzothiazol?2?yl)?6?(2?(3?(dicyanomethylene)?5,5?dimethylcyclohex?1?en?1?yl)vinyl)?4?methylphenyl acrylate，命名為SYP。檢測(cè)方法是在pH為7.4的Hepes?CH₃OH?CH₃CN(1:1:1,v/v/v)的緩沖溶液中，通過熒光分光光度計(jì)定量地檢測(cè)半胱氨酸的含量。該檢測(cè)過程簡(jiǎn)便、靈敏、快速，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及半胱氨酸檢測(cè)，具體屬于一種檢測(cè)半胱氨酸的試劑及其合成方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

生物硫醇，包括半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和谷胱甘肽(GSH)近年來(lái)引起了很多關(guān)注，主要是因?yàn)樗鼈冊(cè)谠S多生理和病理過程中起著至關(guān)重要的作用，如可逆氧化還原穩(wěn)態(tài)，組織和人體新陳代謝。其中，半胱氨酸(Cys)是一種重要的生物硫醇，在蛋白質(zhì)合成、排毒和新陳代謝中起重要作用，也與許多疾病有關(guān)。半胱氨酸缺乏會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞生成減少、牛皮癬、神經(jīng)毒性、水腫和肝損傷，Cys的水平在心血管疾病和阿爾茨海默氏病中也有過量表達(dá)。因此，建立一種敏感的檢測(cè)生物細(xì)胞和體內(nèi)半胱氨酸的方法，方便研究相關(guān)疾病的病理并有助于相關(guān)的診斷和預(yù)后。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種區(qū)分檢測(cè)半胱氨酸的試劑及其合成方法和應(yīng)用，所述試劑可用于半胱氨酸檢測(cè)，且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，操作方便，選擇性好，靈敏度高。

本發(fā)明提供的一種區(qū)分檢測(cè)半胱氨酸的試劑，它是苯并噻唑衍生物，中文名稱為(E)-2-(苯并噻唑-2-基)-6-(2-(3-(二氰基亞甲基)-5,5-二甲基環(huán)己-1-烯-1-基)乙烯基)-4-甲基苯基丙烯酸酯，英文名稱為(E)-2-(benzothiazol-2-yl)-6-(2-(3-(dicyanomethylene)-5,5-dimethylcyclohex-1-en-1-yl)vinyl)-4-methylphenylacrylate，命名為SYP，結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明提供的一種區(qū)分檢測(cè)半胱氨酸的試劑SYP的合成方法，步驟為：

(1)按摩爾比1：1：0.01將2-氨基硫酚、5-甲基水楊醛和硝酸銀添加到DMSO中混合，室溫下避光攪拌2小時(shí)；然后用二氯甲烷稀釋3倍，用鹽水洗滌，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮并用體積比1:6的乙酸乙酯/石油醚通過柱色譜法純化，獲得淺黃色固體即為2-苯并噻唑-2-基-4-甲基苯酚；

(2)按摩爾比1.8：3.9將化合物2-苯并噻唑-2-基-4-甲基苯酚和六亞甲基四胺溶解在三氟乙酸中，在攪拌下回流過夜；反應(yīng)完成并冷卻至室溫后，使用氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH值到固體完全沉淀，過濾，用水洗滌，真空干燥并通過體積比1:5的乙酸乙酯/石油醚柱色譜法純化，獲得黃色固體的化合物3-(苯并噻唑-2-基)-2-羥基-5-甲基苯甲醛；

(3)按摩爾比1：1將化合物3-(苯并噻唑-2-基)-2-羥基-5-甲基苯甲醛和化合物2-(3,5,5-三甲基環(huán)己-2-烯-1-基)丙二腈加入到乙醇中，在攪拌下加入0.1當(dāng)量哌啶混合，加熱回流10小時(shí)；反應(yīng)完成并冷卻至室溫后，將混合物過濾，用乙醇洗滌，并在真空下干燥，得到橙紅色固體化合物(E)-2-(3-(3-(3-苯并噻唑-2-基)-2-羥基-5-甲基苯乙烯基)-5,5-二甲基環(huán)己-2-烯-1-亞丙基)丙二腈；