[發明專利]妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202010125618.6
• 申請日: 2020-02-27
• 公開（公告）號: CN111175496A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 王赟;劉振世
• 申請（專利權）人: 江蘇澤成生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/577;G01N33/533;G01N33/535
• 代理公司: 上海聯科律師事務所 31350
• 代理人: 趙旭

1.妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：包括相互獨立包裝的熒光素標記的PAPP-A抗體的溶液、堿性磷酸酶標記的PAPP-A抗體的溶液、包被熒光素抗體的磁微粒懸浮液、PAPP-A校準品、發光底物的溶液。

2.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述堿性磷酸酶標記的PAPP-A抗體由堿性磷酸酶與PAPP-A抗體通過交聯劑辛二酸二琥珀酰亞胺酯連接而成。

3.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述熒光素標記的PAPP-A抗體的溶液濃度為0.8～1.2μg/ml，pH為7～9。

4.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述堿性磷酸酶標記的PAPP-A抗體的溶液濃度為0.5～0.8μg/ml，pH為7～9。

5.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述熒光素標記的PAPP-A抗體的溶液通過包括以下步驟的操作制備而成：

Sa1：配置Tris-HCl緩沖液，使所述Tris-HCl緩沖液中含有4～8wt％的PEG-6000、0.7～0.9wt％的NaCl、0.08～0.1wt％的疊氮鈉、0.58～0.62wt％的ProClin-300、0.8～1wt％牛血清白蛋白和19～21mM的EDTA，調節所述Tris-HCl緩沖液的pH為7～9；

Sa2：向所述Tris-HCl緩沖液中加入所述Tris-HCl緩沖液體積0.6～0.8％的PAPP-A抗體充分混合，室溫靜置反應；

Sa3：將Sa2制得的反應液通過凝膠柱，調節濃度和pH即得。

6.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述堿性磷酸酶標記的PAPP-A抗體的溶液通過包括以下步驟的操作制備而成：

Sb1：用二甲基亞砜溶劑將PAPP-A抗體溶解為30～60mg/ml濃度的溶液并加入交聯劑辛二酸二琥珀酰亞胺酯，混合均勻，室溫反應2～3h；用二甲基亞砜溶劑將PAPP-A抗體與辛二酸二琥珀酰亞胺酯的連接物的濃度稀釋8～10倍，2～8℃條件下保存；

Sb2：用含有1～2mg/ml堿性磷酸酶的堿性磷酸酶緩沖液，按照堿性磷酸酶與所述連接物的摩爾比為1:(1.8～2.2)的用量將所述堿性磷酸酶與所述連接物混合均勻，室溫反應1～2h；

Sb3：將Sb2制得的反應液通過G-25凝膠柱，調節濃度和pH即得。

7.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述包被熒光素抗體的磁微粒懸浮液通過包括以下步驟的操作制備而成：在偶聯劑碳二亞胺的環境下，將含有羧基活性基團的磁微粒與熒光素抗體混合均勻，室溫反應10～20h，磁分離，除上清液，調節濃度和pH即得；所述磁微粒具有超順磁性，且每克所述磁微粒上所帶的羧基活性基團含量不小于0.5mml；所述熒光素抗體為單克隆抗體，且稀釋效價大于1:100萬。

8.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述發光底物為Lumi-pHos480、金剛烷、魯米諾及其衍生物、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯中的一種或多種。

9.根據權利要求1所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于：所述發光底物的溶液通過包括以下步驟的操作制備而成：準確稱量2g的TRIS、6gNaCl、0.005gNa₂SO₃和0.5mlProClin-300分別加入600ml純化水中并充分溶解，調節pH至7.5；加200ml的發光底物，用0.2μm濾器過濾后再用純化水定容至1000ml即得。

10.如權利要求1～9任一項所述的妊娠相關蛋白A磁微粒化學發光檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：包括如下步驟：

Sc1：免疫反應：在反應管中加入待檢測樣本，依次加入所述熒光素標記的PAPP-A抗體的溶液和所述堿性磷酸酶標記的PAPP-A抗體的溶液混勻，在20～40℃下溫育30min，制得雙抗原夾心復合物的溶液；

向所述雙抗原夾心復合物的溶液中加入所述包被熒光素抗體的磁微粒懸浮液混勻，20～40℃下溫育30min，將所述雙抗原夾心復合物固定在磁性微球上；

Sc2：洗滌：向Sc1制備的溶液中加清洗液，震蕩，使磁微粒在磁場中沉降，除上清并去除掉沒有通過待測抗體形成雙抗原夾心復合物的連接標記示蹤物的抗原；重復本步操作0～5次；

Sc3：加底物檢測：在反應管中加入堿性磷酸酶催化的所述發光底物的溶液，充分混勻，檢測發光值，計算得到妊娠相關蛋白A的含量。