[發明專利]一種核基質蛋白22酶聯免疫檢測試劑盒制備方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010123138.6
• 申請日: 2020-02-27
• 公開（公告）號: CN111323585A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 鄒檢平
• 申請（專利權）人: 北京健平金星生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種核基質蛋白22酶聯免疫檢測試劑盒制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、制備核基質蛋白22多克隆抗體標記辣根過氧化物酶的酶標結合物；

S2、核基質蛋白22校準品的制備；

S3、固相包被板的制備；

S4、濃縮洗液制備；

S5、終止液、底物和底物緩沖液的制備。

2.如權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述S1步驟包括：

S11、稱取辣根過氧化物酶溶于戊二醛溶液中靜置，制成酶溶液；

S12、用生理鹽水對S11步驟中制成的酶溶液進行洗脫，并置于容器中攪拌；

S13、將待標記的核基質蛋白22進行稀釋，并逐滴加入到酶溶液中；

S14、向S13步驟中加入核基質蛋白22的酶溶液中加入碳酸緩沖液，并繼續攪拌；并在攪拌后加入賴氨酸，待均勻后進行第一次靜置；待第一次靜置完成后在攪拌的狀態下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，進行第二次靜置；

S15、對S14步驟制備完成的溶液進行離心分離，并去除上清液；沉淀物用半飽和硫酸銨二次清洗，并將清洗后的沉淀物溶于PBS中；

S16、將S15步驟制備完成的溶液置于透析袋中進行透析，去除銨離子后進行離心分離，離心分離后去除沉淀，上清液為酶標結合物，分裝后進行保存。

3.如權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述S2步驟包括：

核基質蛋白22校準品以動物血清或蛋白緩沖液為基質，加入核基質蛋白22純品配制而成。

4.如權利要求3所述制備方法，其特征在于，核基質蛋白22校準品的濃度為80IU/ml。

5.如權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述S3步驟包括：

S31、采用緩沖液與核基質蛋白22單克隆抗體混合制成包被液，并將其負載于固相載體96孔板上；

S32、洗滌對S31步驟制備完成的包被用蒸餾水洗滌三次；

S33、向孔板中每孔分別加入封閉液，進行靜置；靜置后甩掉封閉液，進行防濕干燥；干燥后封袋并保存。

6.如權利要求5所述制備方法，其特征在于，所述S31步驟具體為：采用緩沖液與核基質蛋白22單克隆抗體混合，溶解混勻后，調整pH值至4-5，加入3-8mg核基質蛋白22單克隆抗體混勻，然后加入微孔板各孔中，每孔110ul，4℃過夜。

7.如權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述S4步驟具體為：選用10mM/LPBST濃縮洗液調整pH至7-8，并通過雙蒸水稀釋后待用。

8.如權利要求1所述制備方法，其特征在于，所述S5步驟為：

選用硫酸作為終止液；通過TMB和底物緩沖液混合得到發光底物；選用過氧化氫溶液為底物緩沖液。

9.如權利要求8所述制備方法，其特征在于，所述S5步驟為：

選用2mol/L的硫酸作為終止液；通過TMB和底物緩沖液混合得到發光底物；選用過2％的氧化氫溶液為底物緩沖液。

10.一種使用如權利要求1-9任一項所述試劑盒制備方法制成的試劑盒，其特征在于，包括：

核基質蛋白22校準品、核基質蛋白22多克隆抗體預包被的96孔板、核基質蛋白22多克隆抗體的酶標記物、與所述酶作用的發光底物、底物緩沖液、濃縮洗液和終止液。