[發明專利]一種新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)血清學診斷試劑盒

在審

• 申請號: 202010121435.7
• 申請日: 2020-02-26
• 公開（公告）號: CN111239392A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 范春雷;朱曉進;程向榮
• 申請（專利權）人: 浙江諾迦生物科技有限公司;杭州邁爾德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;C12N15/867;C12N15/65;C12N15/50;C07K14/165
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 周紅芳

本發明公開了一種新型冠狀病毒肺炎（COVID?19）血清學診斷試劑盒，包括S?IgM/IgG和N?IgM/IgG兩種試紙條，組裝成一個雙抗原四聯檢試劑盒，可以針對新型冠狀病毒肺炎COVID?19病人血清抗新型冠狀病毒棘突蛋白S的IgM/IgG抗體及抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白N的IgM/IgG抗體四個指標同時檢測。本發明的試劑盒通過量子點熒光標記和多級偶聯放大信號提高檢測靈敏度、通過雙抗原四聯檢提高檢測準確性、通過建立病毒滅活系統保障檢測過程中的生物安全性。試劑盒適合包括全血、血漿、血清檢測，可應用于新型冠狀病毒肺炎(COVID?19)血清學診斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)血清學診斷試劑盒。

背景技術

冠狀病毒在系統分類上屬冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)。冠狀病毒屬的病毒是具外套膜(envelope)的正鏈單股RNA病毒，直徑約80～120nm，其遺傳物質是所有RNA病毒中最大的，感染宿主包括人、鼠、蝙蝠、豬、貓、穿山甲、犬、狼、雞、牛、蛇類、禽類等脊椎動物。2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-19,曾用名2019-nCoV)是目前已知的第7種可以感染人的冠狀病毒，其余6種分別是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。在新疫情突發時，如2019新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)，新病毒的早期檢測一般采用核酸檢測的方法，因為病毒的基因組可以很快被破譯，隨即可合成特異性核酸熒光探針制備熒光定量PCR檢測試劑盒投入使用。該方法具有技術成熟、研發周期短、特異性好等優點；但同時也存在樣本需前處理、檢測時間長、需專業儀器專業人員操作、以及試劑貴等缺點，而且也存在一定的假陰性。血清中抗病毒-IgM抗體是病毒復制和早期感染的標志，隨后會有IgG抗體升高。因而血清學IgM/IgG抗體通常作為病毒感染的檢測指標，且可判斷近期感染和繼往感染。如HIV1/2、HBV、HCV、巨細胞病毒(CMV)、單純皰疹病毒等的血清學IgM/IgG檢測。同樣，2019-nCoV感染的患者也可通過檢測患者血清中2019-nCoV相關蛋白，如Nucleocapsid?phosphoprotein(N-protein)和S-protein的IgM/IgG抗體來判斷。這個指標的檢測最常用的方法是膠體金免疫層析法試紙，但由于個體的差異，患者產生的抗體水平會差異非常大，有些含量會很底，用傳統的膠體金試紙檢測不到。

發明內容

針對現有技術存在的上述技術問題，我們采用量子點熒光標記、多級偶聯放大檢測信號、雙抗原四聯檢等設計，發明了一種新型冠狀病毒COVID-19血清學診斷試劑盒。同時考慮到新型冠狀病毒高傳染性和危害性，我們首創檢測試劑盒的病毒滅活設計，保障檢測過程中的生物安全性。為實現本發明，我們對抗原重組蛋白進行了定點生物素化設計，使其通過生物素-親和素連接于量子點標記的鏈霉親和素，從而實現檢測信號的級偶聯放大，提高檢測的靈敏度；通過同時檢測血清中抗新型冠狀病毒S蛋白的IgM和IgG抗體，以及抗N蛋白的IgM和IgG抗體四項指標來確保檢測的準確性；試劑盒設計了病毒滅活系統，樣本取樣后即放入裝有病毒滅活劑的管子里，在樣本稀釋液中加入了RNA酶，可有效降解破壞新型冠狀病毒的核酸遺傳物質，在試紙條的樣本墊中加有病毒光化學滅活劑和RNA酶，在不影響檢測的前提下，通過多環節、多手段來滅活病毒，確保檢測過程中的生物安全性。

所述的一種新型冠狀病毒肺炎COVID-19血清學診斷試劑盒，其特征在于包括S-IgM/IgG和N-IgM/IgG兩種試紙條，所述S-IgM/IgG和N-IgM/IgG兩種試紙條并排組裝于一個雙卡條中，構成一個雙抗原四聯檢試劑卡；

所述S-IgM/IgG試紙條和N-IgM/IgG試紙條均包括免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條包括底襯、硝酸纖維素膜、樣品墊、釋放墊和吸水紙；所述樣品墊、釋放墊、硝酸纖維素膜和吸水紙搭接組裝在底襯上，釋放墊和吸水紙分別疊壓在硝酸纖維素膜的兩端，并在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區，樣品墊疊壓在釋放墊上；所述檢測區的硝酸纖維素膜上設置靠近釋放墊的二條檢測線區M和G線、靠近吸水紙的一條控制線區C線；