[發明專利]辛酰化Ghrelin在促進牛卵母細胞卵丘細胞復合體雌二醇和孕酮分泌中的應用

有效

• 申請號: 202010121175.3
• 申請日: 2016-08-01
• 公開（公告）號: CN111304158B
• 公開（公告）日: 2022-01-21
• 發明（設計）人: 劉彥;許曉玲;白佳樺;馮濤;宋玉清;肖霖力
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明提供了辛酰化Ghrelin在體外促進牛卵母細胞卵丘細胞復合體雌二醇和孕酮分泌中的應用，進而可體外抑制牛卵母細胞減數分裂。通過辛酰化Ghrelin體外培養抑制牛卵母細胞減數分裂的恢復，從而使得卵母細胞核和細胞質同步成熟，進而提高了牛卵母細胞的質量以及體外發育能力。能夠成為新型的減數分裂制劑藥物在畜牧業生產上推廣應用，具有良好的市場效應和社會效應。

本案為分案申請，其母案申請日為2016年8月1日，申請號為2016106215951，發明名稱為“辛酰化Ghrelin在促進牛卵母細胞體外成熟中的應用”。

技術領域

本發明涉及家畜配子胚胎工程技術領域，具體涉及辛酰化Ghrelin在促進牛卵母細胞體外成熟中的應用。

背景技術

牛卵母細胞體外成熟(In Vitro Maturation，IVM)作為胚胎體外生產技術(InVitro Production，IVP)的三大技術環節之一，是一項重要的繁殖生物技術，也是決定體外胚胎生產的關鍵技術。其通過體外成熟培養屠宰場廢棄卵巢有腔卵泡來源卵母細胞獲得大量可用卵子，可以為育種、克隆、性別控制、細胞核移植、轉基因動物生產等提供豐富的成熟卵源，變廢為寶。

卵母細胞體外成熟是指卵母細胞離開卵泡環境后，在體外一定培養條件下能夠自發恢復減數分裂進程，并獲得能夠正常受精以及進一步發育的能力。卵母細胞的體外成熟是一個復雜的生理過程，主要包括細胞核成熟和細胞質成熟。但在體外成熟過程中，雖然能夠使卵母細胞在體外環境下完成減數分裂,但是由于離開了卵泡液，細胞質在未發育好的情況下細胞核恢復減數分裂，導致細胞核、細胞質成熟不同步，這樣就會造成卵母細胞質量以及受精后胚胎發育能力較差，因此限制了此項技術的利用效率，細胞核、細胞質同步成熟成為亟待解決的問題。

鑒于以上原因，許多學者開發了卵母細胞體外兩段成熟培養方法，即通過體外使用減數分裂抑制劑暫時可逆的阻止卵母細胞減數分裂恢復，同時促進胞質發育，然后移出減數分裂抑制環境，進行體外成熟。其中發明專利CN 102899286 A公開了卵母細胞體外成熟的培養液以及分段培養方法。

Ghrelin(Ghre在印歐語系作詞根，意為“grow”)。目前，我國學術界對Ghrelin尚沒有統一的譯名，所以有生長激素促釋放劑、生長激素促分泌素、生長激素釋放肽、生長素和腦腸肽等多種稱謂。Ghrelin含28個氨基酸殘基組成，其中經測定，發現在血液和組織中Ghrelin以兩種主要形式存在：N端辛酰化和脫酰化修飾的Ghrelin。

Ghrelin的功能除了具有調節生長素的分泌、胃腸生理活動、能量代謝、心血管活動等功能外，還具有調節生殖的作用。越來越多的研究表明，Ghrelin在生殖軸的不同層次影響著動物的生殖。其中，對激素的分泌有著十分重要的調節作用。同時，Ghrelin還具有調節動物的發情，胚胎的發育等功能。

但是，辛酰化Ghrelin在牛卵母細胞體外分段成熟培養以及進一步用于體外受精、胚胎生產的作用尚不確定，目前尚無此方面的研究報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種牛卵母細胞體外成熟前培養液。

本發明另一目的是提供一種促進牛卵母細胞體外成熟的培養液及方法。

本發明再一目的是提供辛酰化Ghrelin在促進牛卵母細胞成熟中的應用及辛酰化Ghrelin在制備用于促進牛卵母細胞體外成熟藥物/減數分裂抑制劑藥物中的應用。

所述牛卵母細胞體外前成熟培養液以牛卵母細胞體外培養液為基質，在所述基質中含有辛酰化Ghrelin。

優選地，所述辛酰化Ghrelin濃度為10-50ng/mL，更優選，所述辛酰化Ghrelin濃度為50ng/mL。

優選地，所述基質為不含hepes的TCM199培養液。