[發(fā)明專利]通用埃博拉病毒病免疫球蛋白及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010121145.2
• 申請(qǐng)日: 2020-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN111518815B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙永坤;趙忠鵬;張穎;楊松濤;高玉偉;閆飛虎;鄭學(xué)星;王化磊;李敏;楊曉嵐;夏咸柱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院軍事獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/40
• 分類號(hào): C12N15/40;C07K14/08;C12N15/866;C12N15/863;A61K39/12;A61K39/42;A61P31/14;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發(fā)明提供一種通用埃博拉病毒病免疫球蛋白及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明首先分析扎伊爾型、蘇丹型、科特迪瓦型埃博拉病毒基因組，優(yōu)化埃博拉病毒GP和VP40基因序列，形成“嵌合類病毒顆粒”型序列，使其能全面覆蓋三型病毒的主要抗原表位；然后，分別利用昆蟲?桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、痘苗病毒重組活載體疫苗系統(tǒng)表達(dá)、純化和制備埃博拉嵌合病毒樣顆粒疫苗抗原；最后，免疫動(dòng)物獲得高免血漿，經(jīng)胃蛋白酶酶切、硫酸銨沉淀、層析柱純化，獲得高純度的抗埃博拉病毒病免疫球蛋白F(ab’)₂，并對(duì)其進(jìn)行安全性和有效性評(píng)價(jià)。本發(fā)明提供的通用埃博拉病毒病免疫球蛋白可預(yù)防和治療三型埃博拉病毒感染所引起的出血熱，為埃博拉疫情防控提供有力工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體地說，涉及一種通用埃博拉病毒病免疫球蛋白及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

埃博拉出血熱由埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)引起，病死率可高達(dá)90％，屬于生物安全Ⅳ級(jí)病毒。本病自1976年于非洲埃博拉河流域發(fā)現(xiàn)以來，每年都散發(fā)，WHO確認(rèn)其為全球公共衛(wèi)生緊急事件，呼吁全球加強(qiáng)藥物研發(fā)。

EBOV包括五種亞型，埃博拉-扎伊爾(Ebola-Zaire，Z-EBOV)、埃博拉-蘇丹(Ebola-Sudan，S-EBOV)、埃博拉-科特迪瓦(Ebola-Coted’Ivoire，C-EBOV)、埃博拉-萊斯頓(Ebola-Reston，R-EBOV)和埃博拉-本迪布焦(Ebola-bundibugyo，B-EBOLA)。其中以Z-EBOV的毒力最強(qiáng)，人感染后死亡率最高；S-EBOV次之；C-EBOV對(duì)黑猩猩有致病性，對(duì)人則毒力最弱；R、B-EBOV對(duì)人不致病，但對(duì)人以外的靈長(zhǎng)類動(dòng)物具有致死性，實(shí)驗(yàn)室研究表明五型病毒之間僅有較弱的交叉免疫保護(hù)性。目前該病尚無有效預(yù)防和救治藥物。

抗血清用于抗病毒治療已有100多年的歷史，制備工藝經(jīng)歷了4個(gè)發(fā)展階段，使安全性和有效性大大提升，在目前市場(chǎng)上各階段產(chǎn)品均有流通。免疫異源動(dòng)物后經(jīng)新生產(chǎn)工藝制備的精制通用埃博拉病毒病免疫球蛋白安全性高、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、作用快、制備周期短，生產(chǎn)量大，對(duì)日趨嚴(yán)峻的埃博拉疫情防控仍是最廉價(jià)、最有效的救命藥。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種通用埃博拉病毒病免疫球蛋白及其制備方法與應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供一種分離的聚核苷酸(GP)，所述聚核苷酸包含如下序列或由其組成：

i)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；

ii)SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個(gè)或多個(gè)核苷酸且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列；

iii)在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:1所示序列雜交且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列，所述嚴(yán)格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜；或

iv)與i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

第二方面，本發(fā)明提供一種分離的聚核苷酸(VP40)，所述聚核苷酸包含如下序列或由其組成：

i)SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；

ii)SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失和/或增加一個(gè)或多個(gè)核苷酸且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列；

iii)在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO:2所示序列雜交且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列，所述嚴(yán)格條件為在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜；或

iv)與i)、ii)或iii)的核苷酸序列具有90％以上同源性且表達(dá)相同功能蛋白質(zhì)的核苷酸序列。