[發(fā)明專利]sll0528基因在提高集胞藻PCC6803氧化脅迫耐受性中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010119666.4
• 申請(qǐng)日: 2020-02-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111172092B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳谷;劉秤利;許白雪;林詩(shī)琪;周健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/31;C12N15/65;C12N15/74;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

1.sll0528基因在提高集胞藻PCC6803氧化脅迫耐受性中的應(yīng)用，其特征在于：過(guò)表達(dá)sll0528基因提高集胞藻PCC6803氧化脅迫耐受性，敲除sll0528基因降低集胞藻PCC6803氧化脅迫耐受性；

所述的氧化脅迫包括甲萘醌脅迫或過(guò)氧化氫脅迫；

所述的sll0528基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述的sll0528基因在構(gòu)建氧化脅迫耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述的氧化脅迫耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株，其過(guò)表達(dá)的基因sll0528由光誘導(dǎo)型強(qiáng)啟動(dòng)子psbA2調(diào)控，啟動(dòng)子psbA2的核苷酸序列或基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述的氧化脅迫耐受性顯著提高的集胞藻PCC6803藻株的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

（1）擴(kuò)增目的片段：以野生型集胞藻PCC6803基因組為模板，以序列表中SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4作為目的片段slr2030的上、下游引物，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8為psbA2啟動(dòng)子的上、下游引物，SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10為sll0528的上、下游引物，SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12為slr2031的上、下游引物，擴(kuò)增得到slr2030、psbA2、sll0528和slr2031；以質(zhì)粒pET-30b為模板，以SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6作為引物，擴(kuò)增得到卡那霉素抗性基因km^r；

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒：以pUC118作為質(zhì)粒載體，用限制性內(nèi)切酶Hind Ⅲ和PstⅠ將目的片段slr2030和質(zhì)粒pUC118酶切，再用T4 DNA酶將酶切好的slr2030連接到pUC118上；同樣地，用限制性內(nèi)切酶PstⅠ和PstⅠ，PstⅠ和XbaⅠ，XbaⅠ和SmaⅠ，SmaⅠ和EcoRⅠ依次剪切獲得目的片段km^r，psbA2啟動(dòng)子，sll0528，slr2031，并將其用T4 DNA酶依次連接插入載體質(zhì)粒pUC118中，構(gòu)建得到同源重組雙交換質(zhì)粒P3031；

（3）構(gòu)建過(guò)表達(dá)菌株：將同源重組雙交換質(zhì)粒P3031通過(guò)自然轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入集胞藻PCC6803野生型中，使帶強(qiáng)啟動(dòng)子psbA2、sll0528和km^r基因的目的片段通過(guò)同源雙交換的方式插入集胞藻PCC6803的基因組，構(gòu)建sll0528過(guò)表達(dá)菌株，命名為Osll0528。