[發明專利]一種基于細胞培養的干細胞凍干粉制備方法

在審

• 申請號: 202010117814.9
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN113116802A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 王彥;趙允;李歡歡
• 申請（專利權）人: 河南省銀豐生物工程技術有限公司;銀豐生物工程集團有限公司
• 主分類號: A61K8/98
• 分類號: A61K8/98;A61K8/99;A61K8/02;A61Q19/08;C12N5/0775
• 代理公司: 南京君陶專利商標代理有限公司 32215
• 代理人: 沈根水

本發明公開了一種基于細胞培養的干細胞凍干粉制備方法，包括提取充質干細胞、培育充質干細胞、收集培養液上清液、過濾和濃縮、冷凍和干燥。本發明的有益效果是：在提取充質干細胞時，利用輸送泵通過導入管將儲液箱中的待分離液吸出，經過濾網過濾留下所需的MSC液體，流出到培養基上，且培養套設置多個空腔能夠用于容納培養基，避免了運輸過程中的感染等意外，同時也避免了互相感染的問題；充質干細胞培養的氧濃度為2?3%，溫度為37C?二氧化碳濃度為5%，在低氧濃度下，促進成體干細胞的擴増，縮短細胞倍増的周期；使用凍干粉保護劑，然后通過0.21um濾膜過濾除菌，保證制備凍干粉的高純度，增強其修復功能。

技術領域

本發明涉及一種干細胞凍干粉制備方法，具體為一種基于細胞培養的干細胞凍干粉制備方法，屬于凍干粉制備技術領域。

背景技術

干細胞，是一類具有自我復制能力和多向分化潛能的細胞，在一定條件下，可以分化成多種功能細胞及組織，同時還具有免疫調節、修復、再生受損組織及衰老器官的生物學功能。研究發現，干細胞具有較高的端粒酵活性，是人體的青春活力因子，隨著年齢的増長，人體內的干細胞數會不斷降低，増殖分化潛能也不斷的衰弱，直接導致衰老和疾病的發生發展。

皮膚老化是指皮膚功能衰老性損傷，使皮膚對機體的防護能力，調節能力等減退。皮膚的老化表現為皮膚出現小皺紋、彈性下降、皮膚松弛等.隨著生活水平的不斷提高，人們比以往更加注重皮膚及身體的保養，對美的追求也越來越高，鑒于干細胞來源廣泛，取材容易，體外增殖穩定，免疫原性低等特征，逐漸成為近年來整形美容外科的研究熱點。

近年來，干細胞在抗衰老化妝品中的應用也成為了研究的熱點，但是，市場上美容行業中有些所謂的干細胞針劑，其主要的干細胸來源為從產的胚胎中提取，如果沒有經過配型就直接注射胚胎干細胞，容易引起免疫排斥反應、花費巨大，價格較高，需要根據個體的情況進行定制，沒有普遍適用性，且在保存和制備的過程中成本較高。

發明內容

本發明的目的就在于為了解決上述問題而提供一種基于細胞培養的干細胞凍干粉制備方法。

本發明通過以下技術方案來實現上述目的：一種基于細胞培養的干細胞凍干粉制備方法，包括以下步驟：

步驟一、提取充質干細胞，利用血液中提取的成體充質干細胞進行無血清培養；

步驟二、培育充質干細胞，將提取的充質干細胞放入無血清培養基中培養，并在培養基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，核糖核音，脫氧核糖核昔，FGF和TGF-B；

其中，無血清培養基中血清曾代物的體積分數為8-10%，L-谷気酸酰胺的濃度為280-300ng/iil，核糖核苛的濃度為10?20ng/M，脫氧核糖核昔的濃度為l0-20ng/ml，成纖維細胞生長因子的濃度為15-25ng/Bl，轉化生長因子?B的濃度為15-25ng/n，維生素B5的濃度為3-5ng/ml，維生素B12的濃度為0.017.02ng/nl，錐生素C的濃度為30-50ng/ml，維生素E的濃度為0.3-0.5ng/ml。

步驟三、收集培養液上清液，在干細胞培育后，收集低傳代人間充質干細胞上清液。

步驟四、過濾和濃縮，采取上清液后釆用0.2-0. 22md的無菌過濾器對收集得到的上清液進行過濾，然后經過濃縮。

步驟五、冷凍和干燥，將過濾濃縮過后的上清液進行冷凍和升華干燥，去除冰晶制備成凍干粉。

作為本發明再進一步的方案：所述步驟一中，在提取充質干細胞時，利用輸送泵通過導入管將儲液箱中的待分離液吸出，經過濾網過濾留下所需的MSC液體，流出到培養基上，且培養套設置多個空腔能夠用于容納培養基。

作為本發明再進一步的方案：所述步驟二中，充質干細胞培養的氧濃度為2-3%，溫度為37C?二氧化碳濃度為5%。