[發明專利]一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法

在審

• 申請號: 202010116898.4
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111424100A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 彭海東;鄭文濤;李硙梓
• 申請（專利權）人: 寧波明舟生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了細菌檢測技術領域的一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法，肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體包括以下三對引物：肺炎軍團菌的檢測引物如下：上游引物：5’?AGGGTTGATAGGTTAAGAGC?3’下游引物：5’?ABGGTCAGATAATACTGGTTGAC?3’；腦膜炎奈瑟菌的檢測引物如下：上游引物：5’?GCTGGCGCCGCTGGCAACAAAATTC?3’下游引物：5’?CTTCTGCAGATTGCGGCGTGCCGT?3’；肺炎支原體的檢測引物如下：上游引物：5’?GAAGCTTATGGTACAGGTTGG?3’下游引物：5’?ATTACCATCCTTTCTTGTAAGG?3’；該三種細菌的檢測采用的是全基因合成的方法，將肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的保守序列構建到pJET1.2載體中，再轉化到DH5a感受態中，挑取單菌落搖菌，作為標準品進行后續PCR檢測實驗，從而提高了細菌的檢測準確性。

技術領域

本發明涉及細菌檢測技術領域，具體為一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法。

背景技術

軍團菌病是由革蘭染色陰性的嗜肺軍團桿菌引起的一種以肺炎為主的全身性疾病，1976年被確認。嗜肺軍團菌是引起軍團菌肺炎最重要的一種。軍團菌存在于水和土壤中，常經供水系統、空調和霧化吸入而被吸入，引起呼吸道感染，亦可呈小的暴發流行。

腦膜炎雙球菌(學名Neisseria meningitidis)，又名腦膜炎奈瑟菌或腦脊髓膜炎雙球菌，簡稱為腦膜炎球菌，是一種革蘭氏陰性菌，因其所導致的腦膜炎而聞名，亦會造成腦膜炎球菌血癥(一種致命性的敗血癥)。它只感染人類，并無寄生的動物，是唯一令細菌性感染腦膜炎成為流行病的病菌。

支原體肺炎患者雖然自感癥狀較重，但胸部體檢一般無明顯異常體征。鼻部輕度鼻塞、流涕，咽中度充血。耳鼓膜常有充血，約15％有鼓膜炎。頸淋巴結可腫大。約10％～15％病例發生少量胸腔積液。除呼吸系統的表現外，支原體肺炎可伴發多系統、多器官損害。皮膚損害可表現為斑丘疹、結節性紅斑、水皰疹等。胃腸道系統可見嘔吐、腹瀉和肝功損害。

現有的肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的序列構建存在嚴重的問題就是在轉化時缺少DH5a，從而不能夠作為標準品使用，為此我們提出一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法，以解決上述背景技術中提出的肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的序列構建在轉化時缺少DH5a，從而不能夠作為標準品使用的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體的檢測方法，肺炎軍團菌、腦膜炎奈瑟菌、肺炎支原體包括以下三對引物：

肺炎軍團菌的檢測引物如下：

上游引物：5’-AGGGTTGATAGGTTAAGAGC-3’

下游引物：5’-ABGGTCAGATAATACTGGTTGAC-3’；

構建到載體中的序列