[發明專利]rhTSG-6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒及其使用方法和應用

有效

• 申請號: 202010116340.6
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111273028B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 王明麗;周煒;何志遠;夏兵兵;吳博;蔣敏之
• 申請（專利權）人: 蕪湖天明生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;C07K16/24;C07K16/06
• 代理公司: 蕪湖安匯知識產權代理有限公司 34107
• 代理人: 尹婷婷

1.一種重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，包括包被有抗rhTSG-6多克隆抗體的酶標板、酶標rhTSG-6重組抗原、rhTSG-6蛋白標準品、樣品稀釋液、洗滌液、顯色液A液、顯色液B液、終止液；

rhTSG-6重組抗原的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示。

2.根據權利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標rhTSG-6抗原為辣根過氧化物酶標記的rhTSG-6重組抗原。

3.根據權利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述包被有抗rhTSG-6多克隆抗體的酶標板的制備方法為：將抗rhTSG-6多克隆抗體經0.05M碳酸鹽緩沖液稀釋后包被酶標板中，4℃過夜后，用pH 7.0內含體積分數為10%小牛血清的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液封閉，洗滌拍干后裝入包裝袋抽真空保存。

4.根據權利要求3所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述抗rhTSG-6多克隆抗體為rhTSG-6重組抗原免疫Balb/c小鼠得到的抗血清經純化后得到。

5.根據權利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述rhTSG-6蛋白標準品為rhTSG-6重組抗原與凍干保護劑混合，經冷凍干燥制備得到。

6.根據權利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液為pH 7.0內含體積分數為10%小牛血清的0.01mol/L磷酸鹽緩沖液；所述洗滌液為pH 7.0內含有體積分數為0.05% Tween-20的0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液。

7.根據權利要求1所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒，其特征在于，所述顯色液A液為加入過氧化氫的溶液；所述顯色液B液為加入四甲基聯苯胺的溶液；所述終止液為2mol/L硫酸溶液。

8.一種非診斷目的的如權利要求1-7任意一項所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步驟：

（1）將rhTSG-6蛋白標準品以樣品稀釋液稀釋成系列濃度的rhTSG-6蛋白標準品溶液；

（2）分別將rhTSG-6蛋白標準品溶液、待測樣品與酶標rhTSG-6重組抗原等體積混合得到混合溶液；

（3）向抗rhTSG-6多克隆抗體預包被酶標板的每孔加入100μl步驟（2）中的混合溶液，置37℃反應30min；

（4）棄去板中液，加入洗滌液200μl/孔，洗滌5次后拍干；

（5）加入顯色液B液50μl/孔，再加入顯色液A液50μl/孔，輕敲板框混勻，室溫避光反應10min；

（6）加入終止液50μl/孔終止反應，并立即在酶標儀上測450nm處的吸光度值；

（7）以rhTSG-6蛋白標準品溶液濃度的負對數為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線，求出線性回歸方程，將待檢樣品孔內吸光度值帶入標準曲線，即可求得待檢測樣品中rhTSG-6的濃度。

9.一種非診斷目的的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6的定量檢測方法，其特征在于，利用權利要求1-7任意一項所述的重組人腫瘤壞死因子α誘導蛋白6直接競爭ELISA法定量檢測試劑盒進行檢測。