[發明專利]鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱、制備方法及純化方法在審
| 申請號： | 202010115354.6 | 申請日： | 2020-02-25 |
| 公開（公告）號： | CN111138538A | 公開（公告）日： | 2020-05-12 |
| 發明（設計）人： | 黎黎;胡深強;王繼文;何樺;李亮;朱佳冉 | 申請（專利權）人： | 四川農業大學 |
| 主分類號： | C07K16/26 | 分類號： | C07K16/26;C07K16/06;C07K14/575;C07K1/22;B01J20/286;B01J20/30;B01D15/08;B01D15/38 |
| 代理公司： | 成都熠邦鼎立專利代理有限公司 51263 | 代理人： | 湯楚瑩 |
| 地址： | 625000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 垂體 催乳素 蛋白 免疫 親和 層析 制備 方法 純化 | ||
1.一種純化鵝垂體天然催乳素蛋白的多克隆抗體，其特征在于：由原核表達的重組催乳素蛋白經免疫動物后采血，分離抗血清后純化制得。
2.根據權利要求1所述的純化鵝垂體天然催乳素蛋白的多克隆抗體，其特征在于：所述的動物是兔。
3.一種鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱，其特征在于：由固相載體和與其偶聯的權利要求1所述的純化鵝垂體天然催乳素蛋白的多克隆抗體組成。
4.根據權利要求3所述的鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱，其特征在于：所述固相載體為纖維素、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃、瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺-瓊脂糖凝膠。
5.根據權利要求3所述的鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱，其特征在于；所述固相載體為CNBr活化的Sepharose 4B。
6.一種如權利要求3所述的鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：
第1步、重組催乳素蛋白免疫動物后采血，分離抗血清后純化制得多克隆抗體；
第2步、將固相載體活化，與多克隆抗體進行偶聯，得到一種鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱。
7.一種純化鵝垂體天然催乳素蛋白的純化方法，其特征在于：包括如下步驟：
第1步、將鵝垂體組織用NP40裂解液磨樣裂解，離心收集上清液；
第2步、將上清液送入權利要求3所述的鵝垂體催乳素蛋白免疫親和層析柱中，進行上樣；
第3步、上樣結束后，再用洗脫液進行洗脫，得到純化蛋白。
8.根據權利要求7所述的純化鵝垂體天然催乳素蛋白的純化方法，其特征在于：在進行第1步離心之前，需要用1X PBS溶液對裂解后的鵝垂體組織溶液進行適當稀釋。
9.根據權利要求7所述的純化鵝垂體天然催乳素蛋白的純化方法，其特征在于：所述的第2步中，在將上清液上樣前，需要先平衡層析柱，所用的平衡液為1X PBS的溶液；上清液的體積是柱體積的4倍。
10.根據權利要求7所述的純化鵝垂體天然催乳素蛋白的純化方法，其特征在于：所述的第3步中，洗脫過程是先用5倍柱體積的1X PBS的溶液洗脫雜蛋白，再用150mM NaCl、pH為2.5緩沖液，洗脫鵝垂體天然催乳素蛋白。
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