[發明專利]一種1,5-脫水山梨醇檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010114208.1
• 申請日: 2020-02-25
• 公開（公告）號: CN111455020A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 張伯平;姚潤杰;蔡澤浪;黃夏雨
• 申請（專利權）人: 深圳市安帝寶科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/32;C12Q1/30;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬體外診斷技術領域，公開了一種適用于全自動生化儀的，酶法1,5?脫水山梨醇檢測試劑盒，其特征是，試劑盒采用包括由己糖激酶、丙酮酸激酶、葡萄糖?6?磷酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、磷酸烯醇式丙酮酸、三磷酸腺苷和β?煙酰胺腺嘌呤二核苷酸組成的系統消除樣本中的葡萄糖；同時采用包括由吡喃糖氧化酶、過氧化氫酶、N?乙基?N?(2?羥基?3?磺丙基)?3?甲基苯胺鈉鹽(TOOS)和4?安替比林(4?AA)組成的Trinder’s反應體系對樣本中的1,5?脫水山梨醇進行定量檢測。與市場上現有的檢測試劑盒相比，本發明試劑盒具有抗葡萄糖干擾能力強、靈敏度高、特異性強、結果準確等優點。

技術領域

本發明屬體外診斷領域，具體涉及一種1,5-脫水山梨醇檢測試劑盒。

背景技術

1,5-脫水山梨醇(1,5-AG) 又稱為1,5- 脫水葡萄糖醇，是一種具有吡喃環結構的六碳單糖。人體血液中1,5-脫水山梨醇的含量與現有的糖尿病指標（如葡萄糖、糖化血紅蛋白、糖化白蛋白）均呈現出顯著的負相關，可以精準反應患者幾天至一周的平均血糖水平，是糖尿病診斷和治療效果確認的重要指標。此外，1,5-AG 還有其它多種臨床應用價值，例如，可作為非糖尿病人群監測餐后高血糖相關的心血管危險發生率的指標；還能很好的反映慢性腎功能衰竭病人的腎小管重吸收功能等。

測定1,5-脫水山梨醇有高效液項色譜、微柱層析法、化學發光法等。這些方法比較準確，但操作繁瑣難以批量檢測，并且這些方法只能現配現用，不能長期保存。而酶法測定由于其無污染，并可試用與生化儀，操作簡單等特點，有利于大規模推廣。目前臨床上主要采用吡喃糖氧化酶法測定1,5-脫水山梨醇，其原理為，通過吡喃糖氧化酶( PROD )催化1,5-脫水山梨醇生成1,5-脫水果糖和過氧化氫，再通過Trinder’s反應體系對過氧化氫進行定量測定。

然而吡喃糖氧化酶可同時催化樣本中的葡萄糖和1,5-脫水山梨醇生成過氧化氫，加之1,5-脫水山梨醇在血液中含量僅為微摩爾級，使消除葡萄糖干擾成為該檢測試劑的關鍵步驟。傳統的使用己糖激酶、丙酮酸激酶、磷酸烯醇式丙酮酸、三磷酸腺苷組成的消除葡萄糖系統，在規定的生化反應時間內，對一些高血糖樣本反應能力有限，而血清1,5-脫水山梨醇值與血糖值呈負相關，使檢測結果容易對患者病情產生誤判。

發明內容

為了克服現有技術存在的缺陷，本發明提供一種1,5-脫水山梨醇檢測試劑盒，可以實現在全自動生化分析儀上對人體血清1,5-脫水山梨醇進行高通量、快速化的定量檢測。該檢測試劑盒具有抗葡萄糖干擾能力強、靈敏度高、特異性強、結果準確等優點，特別適用于高血糖的血清樣本，有利于臨床推廣使用。

本發明提供的檢測試劑盒由檢測試劑R1、檢測試劑R2和標準品組成，具體成分如下：

(1)試劑R1，所述試劑是基于pH為6.8~7.5的HEPES緩沖體系的溶液，含有10~20kU/L己糖激酶、5~10kU/L丙酮酸激酶、5~10kU/L葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、5~10kU/L乳酸脫氫酶、5~10mM磷酸烯醇式丙酮酸、1~2mM三磷酸腺苷和1~2mM β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、1~10mM N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽(TOOS)和防腐劑；

(2)試劑R2，所述試劑是基于pH為7.0~8.0的HEPES緩沖體系的的溶液，含有10~50kU/L吡喃糖氧化酶，5~20kU過氧化氫酶(HRP)、4~20mM 4-安替比林(4-AA)和防腐劑；

(3)標準品，1,5-脫水山梨醇溶液，濃度為300umol/L；

本發明所公開的1,5-脫水山梨醇檢測試劑盒，屬吡喃糖氧化酶法，其檢測原理如下：將樣本（標準品）與試劑R1充分混合消除葡萄糖后，再加入試劑R2，啟動Trinder’s，引起反應體系波長540nm吸光度的變化，進而可以通過與標準曲線對比，計算得到樣本中1,5-脫水山梨醇含量。