[發(fā)明專(zhuān)利]一種藥敏試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010113982.0
• 申請(qǐng)日: 2020-02-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111304278A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮奔放;胡慶豐
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州伽瑪生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/04
• 代理公司: 北京睿智保誠(chéng)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發(fā)明公開(kāi)了一種藥敏試劑盒，包括藥板、檢測(cè)試劑和細(xì)菌培養(yǎng)裝置，所述檢測(cè)試劑以EZMTT作為藥敏指示劑，用于定量和定性分析細(xì)胞中的脫氫酶及NAD(P)H的含量來(lái)檢測(cè)細(xì)菌的活力和數(shù)量。本發(fā)明首次通過(guò)EZMTT作為藥敏指示劑定量分析細(xì)胞中的脫氫酶及NAD(P)H的含量來(lái)檢測(cè)細(xì)菌的活力和數(shù)量,通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)間接反應(yīng)細(xì)菌存活情況的；可以快速檢測(cè)細(xì)菌的MIC值和耐藥性,同時(shí)靈敏檢測(cè)到傳統(tǒng)的濁度法檢測(cè)不到的細(xì)菌異質(zhì)性耐藥的信息。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種藥敏試劑盒。

背景技術(shù)

細(xì)菌感染是常見(jiàn)病癥，不幸的是細(xì)菌的抗生素耐藥性已成為了全世界嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。它延長(zhǎng)了病人住院時(shí)間并大大增加了與傳染病相關(guān)的死亡率。耐藥機(jī)制包括外排泵的誘導(dǎo)，抗性生物的DNA轉(zhuǎn)移和自發(fā)突變。即使自發(fā)突變估計(jì)為106-108細(xì)胞中的1個(gè)，這將導(dǎo)致異質(zhì)性耐藥性，長(zhǎng)期藥物治療可促進(jìn)這一小群耐藥性細(xì)菌的生長(zhǎng),目前除了PCR-DNA測(cè)序外,沒(méi)有現(xiàn)有活菌檢測(cè)方法無(wú)法檢測(cè)到微量的異質(zhì)性耐藥菌。因此，除了開(kāi)發(fā)新藥來(lái)治療多藥耐藥性，我們還可以研發(fā)一種可靠地敏感方法檢測(cè)“隱藏”耐藥性。這對(duì)限制耐藥細(xì)菌的未來(lái)發(fā)生，從而改善傳染病的治療效果。

傳統(tǒng)抗生素敏感性試驗(yàn)(AST)基于細(xì)胞密度的方法，用于快速生長(zhǎng)的細(xì)菌，如濁度法，紙片擴(kuò)散法，肉湯稀釋法，瓊脂稀釋或E-tests實(shí)驗(yàn)方法，最近自動(dòng)化VITEK藥物敏感性分析系統(tǒng)用于臨床診斷[7]。濁度法簡(jiǎn)單，可以在各種條件下連續(xù)監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)，但是靈敏度低，臨床上使用80％的生長(zhǎng)抑制作為鑒定抗性細(xì)菌的截止值。間接阻抗法[8]測(cè)量生物電信號(hào)響應(yīng)細(xì)胞數(shù)量的變化，但需要復(fù)雜的儀器。BactT/ALERT常規(guī)血培養(yǎng)瓶通過(guò)氧耗竭檢測(cè)微生物生長(zhǎng)，并且需要厭氧條件，因此細(xì)菌必須在密封的管或隔室中生長(zhǎng)，這不利于高通量的基于板的AST測(cè)定。MTT測(cè)定是IC50測(cè)量的傳統(tǒng)方法，但MTT法對(duì)細(xì)菌有毒性，只能用作終點(diǎn)測(cè)定。且研究表明終點(diǎn)IC50測(cè)量不夠精確，不足以檢測(cè)部分耐藥性。

目前細(xì)菌耐藥性已成為一個(gè)日益嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，預(yù)計(jì)2050年,多重耐藥菌造成的死亡率每年可達(dá)1000萬(wàn),超過(guò)癌癥死亡率。大量的耐藥菌的出現(xiàn)也進(jìn)一步說(shuō)明了現(xiàn)有的檢測(cè)方法不夠精準(zhǔn)靈敏.因此急待有新方法來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種藥敏試劑盒，首次通過(guò)EZMTT作為藥敏指示劑定量分析細(xì)胞中的脫氫酶及NAD(P)H的含量來(lái)檢測(cè)細(xì)菌的活力和數(shù)量,通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度來(lái)間接反應(yīng)細(xì)菌存活情況的；可以快速檢測(cè)細(xì)菌的MIC值和耐藥性,同時(shí)靈敏檢測(cè)到傳統(tǒng)的濁度法檢測(cè)不到的細(xì)菌異質(zhì)性耐藥的信息。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種藥敏試劑盒，包括革蘭氏陰性菌藥板、檢測(cè)試劑和細(xì)菌培養(yǎng)裝置，其特征在于，所述檢測(cè)試劑以可被氧化還原產(chǎn)生吸光度或熒光變化的四氮唑鹽作為藥敏指示劑，將指示劑與細(xì)菌和革蘭氏陰性菌藥板中的藥物一次性混合共浴，用于連續(xù)定量分析細(xì)胞中的脫氫酶及NAD(P)H的含量來(lái)檢測(cè)細(xì)菌的活力和數(shù)量。

進(jìn)一步的，所述四氮唑鹽為EZMTT。

進(jìn)一步的，所述細(xì)菌培養(yǎng)裝置為管子、96孔板或384孔板。

進(jìn)一步的，所述革蘭氏陰性菌藥板如下：

進(jìn)一步的，所述革蘭氏陽(yáng)性菌藥板如下：

進(jìn)一步的，所述藥板的藥物是所述藥敏試劑盒的組分的任意組合，或添加新的抗菌素。

一種藥敏試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

將菌株、培養(yǎng)基、檢測(cè)試劑按比例混合后,加入含藥管子、含藥96孔板或含藥384孔板；