[發明專利]轉基因玉米BFL4-2外源插入片段旁側序列及其應用

在審

• 申請號: 202010112577.7
• 申請日: 2020-02-24
• 公開（公告）號: CN110951727A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 王磊;鄒俊杰;徐妙云;張蘭;鄭紅艷
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京成實知識產權代理有限公司 11724
• 代理人: 葉立濤

本發明公開了一種轉基因抗蟲耐除草劑玉米BFL4?2外源插入片段旁側序列及其應用。所述旁側序列的核苷酸序列分別如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。本發明提供了用于檢測3’端旁側序列的引物對。本發明的轉基因抗蟲耐除草劑玉米BFL4?2外源插入片段旁側序列的鑒定適用于玉米BFL4?2包括親本、雜交種以及后代相關材料，包括植株、組織、種子及相關制品的檢測。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種轉基因抗蟲耐除草劑玉米BFL4-2外源插入片段旁側序列及其應用。

背景技術

玉米是我國第一大糧食作物，也是重要的飼料及工業原料，在國家糧食安全和國民經濟發展中占有非常重要地位。然而在玉米生長發育過程中，常遭受病害、蟲害、草害的影響。玉米螟俗稱鉆心蟲，是造成玉米常年減產的重要生物災害之一，每年造成玉米產量的重大損失。其危害造成的傷口又是玉米穗腐病病原菌入侵的途徑，害蟲本身常攜帶病原菌，從而誘發和加重玉米穗腐病的發生。農民常大量使用高毒化學農藥進行防治，導致玉米農藥殘留嚴重，且農藥中毒事件也頻頻發生，嚴重危害人民健康。田間雜草與作物爭奪養分、水分和光源，嚴重影響作物的生長發育，造成嚴重減產，一般年份造成10-30%的減產，嚴重可達50%以上，隨著人工成本的增加，依靠人工除草大大增加生產成本。

轉基因技術為玉米的遺傳改良提供了一條新的分子育種途徑。利用轉基因技術培育的抗蟲、抗除草劑轉基因作物是農業害蟲控制和雜草防除的有效手段，可有效減少農民對化學殺蟲劑的依賴，降低人工成本，提高玉米產量和品質，對于保護生態環境和生物多樣性具有重要意義。Bt基因Cry1Ab、Cry1F主要應用于針對鱗翅目害蟲玉米螟和棉鈴蟲的抗蟲基因。孟山都公司的MON810、杜邦公司的TC1507、先正達公司的Bt11、Bt176、先鋒公司的DP4114等均已實現了商業化種植推廣。草甘膦（Glyphosate）是一種內吸性、廣譜性、施用于葉面的有機膦類除草劑，1971年由孟山都公司成功開發，是全球銷售最好的除草劑，具有高效、低毒、易降解等特點。其可以競爭性抑制植物和細菌的莽草酸途徑中5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶（EPSPS）的活性。孟山都公司的NK603、MON87427將具有抗草甘膦除草劑能力的cp4epsps基因轉入農作物中，使這些作物具有抗草甘膦能力，并得到了大規模的商業化應用。

國際農業生物技術應用服務組織發布的2018年全球生物技術/轉基因作物商業化發展態勢表明，2018年轉基因作物繼續保持高應用率，全球種植面積達到1.917億公頃。具有復合抗蟲性狀的轉基因作物種植面積占全球種植面積的42%。在美國，復合性狀的轉基因玉米的種植面積占玉米總種植面積的76%。復合性狀轉基因作物具有成本低、效率高、管理方便、投入較少等優點，將會得到農民的更多的應用和青睞。

轉基因作物抗蟲的關鍵是獲得具有抗蟲性能的優良殺蟲蛋白，目前比較常用的是BT殺蟲蛋白，比如Cry1Ab、Cry1F、Cry2Bb等。單獨使用一種殺蟲蛋白容易引起害蟲的抗性產生和發展。培育含多個抗蟲蛋白的轉基因作物可以更有效地延緩害蟲抗性的發生，種植具有復合性狀的轉基因作物已成為趨勢。我國還沒有商業化種植的轉基因玉米，轉基因玉米研發處于環境安全評價的不同階段，培育的轉基因玉米具有抗蟲耐除草劑復合性狀特性，未來通過轉基因安全評價獲得安全生產證書后，可應用于商業種植，有效的減少玉米螟發生、提高除草效率，降低人工成本和農藥使用，提高玉米生產效益。

發明內容

本發明的目的在于提供一種轉基因抗蟲耐除草劑玉米BFL4-2外源插入片段旁側序列及其應用。

一種轉基因玉米BFL4-2外源插入旁側序列，所述旁側序列的核苷酸序列分別如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

所述外源插入片段包括Cry1Ab、Cry1F和cp4epsps基因。