[發明專利]一種甲乙流感病毒檢測的POCT熒光定量檢測試方法

在審

• 申請號: 202010109582.2
• 申請日: 2020-02-22
• 公開（公告）號: CN111413493A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 孫京海;馮立平;郭正飛
• 申請（專利權）人: 安徽華培生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京興智翔達知識產權代理有限公司 11768
• 代理人: 郭衛芹

本發明公開了一種甲乙流感病毒檢測的POCT熒光定量檢測試方法，包括以下步驟：步驟一、熒光微球標記抗甲乙流感病毒抗體，用活化液替換微球原有保存液；去除未反應或殘余的反應物；去除未偶聯的蛋白；封閉微球上未偶聯的反應基團；步驟二、制備包被有抗甲乙流感病毒抗體的免疫層析試紙條；步驟三、人體鼻咽部，咽部拭子洗脫液；步驟四、進行病毒檢測，以校準品濃度為橫坐標，發光值為縱坐標，采用四參數邏輯擬合法得到標準曲線方程，根據標準曲線方程計算待檢樣本中甲乙流感病毒檢測含量。該發明可以用于病毒的早期診斷；快速、簡便的診斷方法，短時間內得出結果，節省實驗室的勞動力和成本。

技術領域

本發明涉及醫療檢測技術領域，特別涉及一種甲乙流感病毒檢測的POCT熒光定量檢測試方法。

背景技術

流感是由流感病毒引起的傳染性呼吸道疾病。流感病毒主要經空氣飛沫傳播，感染呼吸道，鼻子，喉嚨和肺部，常引起發熱、乏力、肌肉酸痛以及輕到中度的呼吸道癥狀，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。流感病毒抗原檢測試劑可用于流感的輔助診斷，甲型流感病毒各亞型的抗原類檢測試劑還可用于區分季節性流感病毒和新型甲型流感病毒，并可獲得關于流感暴發的流行病學信息。科學家們將流感病毒分類為A，B和C型，A型是最常見的并且通常是引起最嚴重的流行病。B型爆發也可能導致流行病，但是它產生的疾病通常比A型引起的疾病溫和.C型病毒有從來沒有與大流行病有關。流感A是最普遍的，并導致87％的感染，其余13％的報告病例為流感B。

流感抗原測試檢測脫落在呼吸道和鼻腔分泌物中的病毒，流感患者主要在第1天至第3天大量脫落，有些兒童患者仍然在第7天有病毒脫落。因此，必須在感染性早期進行檢測處理。目前，流感患者的確診標準是病毒培養，是收集病毒，然后在組織中孵育培養至少5天，再用熒光標記或其他方法檢測病毒方法。由于時間花費長，不利于及時治療，為此，我們提出一種甲乙流感病毒檢測的POCT熒光定量檢測試方法來解決上述問題。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的是以特定的流感病毒抗原為檢測目標，直接對人咽拭子、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物樣本中的流感病毒進行體外定量檢測。

本發明的上述技術目的是通過以下技術方案得以實現的：

一種甲乙流感病毒檢測的POCT熒光定量檢測試方法，包括以下步驟：包括：步驟一、熒光微球標記抗甲乙流感病毒抗體；

步驟二、制備包被有抗甲乙流感病毒抗體的免疫層析試紙條；

步驟三、人體鼻咽部，咽部拭子洗脫液；

步驟四、進行病毒檢測。

進一步的，所述步驟一，用活化液替換微球原有保存液：離心－去上清－活化液超聲重懸；加入EDC或者EDC+Sulfo-NHS進行活化，稱取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋轉反應15～20min。

進一步的，所述步驟一，去除未反應或殘余的反應物：離心－去上清－超純水超聲重懸，重復2～3次；用反應液超聲重懸微球，然后加入一定量的待標記蛋白，避光反應1～4小時；去除未偶聯的蛋白：離心－去上清－超聲重懸，重復1～2次；封閉微球上未偶聯的反應基團：用封閉液反應0.5～1小；用保存液重懸微球至原體積，2～8℃保存備用。

進一步的，所述步驟二，采點膜儀將抗甲乙流感病毒抗體及羊抗鼠二抗噴涂在NC膜上,分別作為檢測線(T線)與質控線(C線),37℃干燥箱干燥過夜；同時將熒光微球標記抗甲乙流感病毒抗體偶聯物凍干或者噴在結合墊上，30℃真空干燥2h；將NC膜、結合墊、樣品墊、吸水紙及PVC粘性底板組裝好后，切割成試紙條，加干燥劑于4～30℃密封保存，獲取鼻咽部，或者咽部臨床樣品拭子，加入洗脫液中，手動震蕩2～10min，按照1：1或者1：2和樣品液混合，取50-70ul加入試劑卡樣品孔進行檢測。