[發明專利]結核分枝桿菌LAM的單克隆抗體及其用途

在審

• 申請號: 202010109148.4
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111153992A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 張洪濤
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京胸科醫院;北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C07K16/44;C12N15/11;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發明公開了一種結核分枝桿菌LAM的單克隆抗體及其用途，涉及抗體技術領域。本發明公開的結核分枝桿菌LAM的單克隆抗體，具有輕鏈可變區和重鏈可變區,單克隆抗體對LAM的親和力較高，將其用于檢測以LAM作為靶點的分枝桿菌時，具有較高的靈敏度和特異性，為分枝桿菌的LAM檢測提供了一種新的抗體選擇，也為結核病的診斷提供了一種新的診斷方案。

技術領域

本發明涉及抗體技術領域，具體而言，涉及一種結核分枝桿菌LAM的單克隆抗體及其用途。

背景技術

結核病居單一傳染性微生物導致死亡的首位，世界范圍內約23％的人群感染了結核分枝桿菌(Mtb)。結核病與其它疾病共存時，例如人免疫缺陷病毒感染，使得治療更加困難。活動性結核病的早期診斷對于結核病的有效治療是必需的，Mtb及其組分的發現為結核病快速診斷提供直接證據。雖然細菌培養仍然是結核病診斷的金標準，但檢測周期往往較長，且需要專業人員進行操作，檢測敏感性也較低。Xpert-MTB/RIF檢測是一種高敏感性和高特異性的活動性結核病診斷方法，可在2小時內檢出結核分枝桿菌復合群細菌，同時測定結核病常見利福平耐藥相關基因突變情況。然而這種檢測相對昂貴，且需要技術投資。Mtb特異性抗原檢測成為輔助診斷活動性結核病具有吸引力的替代方案。

脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)，一種17.5kDa的糖脂，是結核分枝桿菌細胞壁外表面的一種主要多糖抗原。LAM是一種異質性脂糖，由三部分組成：磷脂酰肌醇甘露糖苷錨定物、多糖主鏈和末端戴帽結構。依據LAM末端的帽狀結構，將LAM分為磷脂酰肌醇LAM(phosphatidylinositol-capped LAM，PILAM)、甘露糖LAM(rnannose-capped LAM，ManLAM)和阿拉伯糖LAM(arabinose-capped LAM，AraLAM)。三種LAM分別存在于不同分枝桿菌中，在細菌的生長致病過程中發揮不同作用。致病性分枝桿菌中富含ManLAM，其可引起宿主強烈的免疫反應，是結核病重要的免疫靶標。

世界衛生組織(WHO)已推介一種商業化尿LAM檢測試劑盒(LF-LAM；Determine TB-LAM；Alere,USA)用于艾滋病患者中疑似結核病的篩查，該試劑盒通過兔抗LAM多克隆抗體進行檢測。研究者試圖在非艾滋病的結核病患者中通過多種方法檢測LAM抗原，然而現有的檢測試劑其檢測敏感性仍較差。

單克隆抗體是免疫診斷領域研發的熱點，具有高特異性、高親和力、抗體均一化和便于生產的優勢，鼠抗LAM單克隆抗體(如CS35)是目前國際上公認的抗LAM單克隆抗體，相對于鼠單克隆抗體，兔單克隆抗體能夠識別一些特殊抗原表位，增加抗體多樣化程度，且兔源抗體往往具有更高的親和力。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種結核分枝桿菌LAM的單克隆抗體及其用途。本發明提供的抗LAM單克隆抗體對LAM具有較高的親和力，將其用于檢測以LAM作為靶點的分枝桿菌時，具有更高的靈敏度和特異性，為分枝桿菌的檢測提供了一種新的抗體選擇，也為結核病的診斷提供了一種新的診斷方案。

本發明是這樣實現的：

第一方面，本發明實施例提供一種抗LAM單克隆抗體或其抗原結合片段，其具有輕鏈可變區和重鏈可變區；

其中，輕鏈可變區各互補決定區的氨基酸序列如下：

LCDR1(輕鏈互補決定區1):QASHSVYGNNELS(SEQ ID NO.1)；

LCDR2:KASTLAS(SEQ ID NO.2)；

LCDR3:QGGYWGNRA(SEQ ID NO.3)；

重鏈可變區各互補決定區的氨基酸序列如下：

HCDR1(重鏈互補決定區1):NYDMG(SEQ ID NO.4)；