[發明專利]一種真菌多糖及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 202010108509.3
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN113293104A8
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 王紅廣;車建途;安娜
• 申請（專利權）人: 北京威力格生物科技有限公司;山西水塔醋業股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12P19/04;C12P19/14;C08B37/00;A61K31/715;A61P37/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李靜

1.一種特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1，其特征在于，保藏編號為：CGMCCNo.19026。

2.一種權利要求1所述特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1的分離純化方法，包括以下步驟：剖開特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1的子實體菌體，取菌體中部至少一塊組織，移至固體培養基上，待組織長出菌絲后挑取菌落放大培養得到。

3.根據權利要求2所述的特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1的分離純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)配制液體培養基：稱取馬鈴薯葡萄糖肉湯粉配制成質量分數為2.5-3.5％的液體培養基，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121℃高壓滅菌備用；

(2)制備固體培養基：取瓊脂粉加入配制好的液體培養基，瓊脂粉占含有瓊脂粉的液體培養基的質量分數為1.8％-2.0％，封口后121℃高壓滅菌15-20min，待滅菌后溫度降至38-42℃時，在超凈條件下趁熱倒進無菌培養皿，培養基占培養皿容積的1/4-1/3，冷卻凝固后封口，制得平板培養基，4℃冷藏保存備用；

(3)分離純化菌種：在超凈條件下用75％酒精消毒特羅格栓菌子實體表面，縱行剖開菌體，取菌體中部一至數塊組織，移至平板培養基上，置于23-25℃下培養，待組織長出無污染的菌絲后，在無菌條件下挑取菌落并移至新鮮平板培養基中放大培養得到菌株TR1；

(4)菌株保藏：挑取菌株TR1放入液體培養基中得到菌絲體的培養液，在含有0.5ml甘油的滅菌菌種保存管中加入1ml含菌絲體的培養液，-80℃保存。

4.一種真菌多糖，其特征在于，提取自一種特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1，所述特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1包括權利要求1所述的特羅格栓菌(Trametestrogii)菌株TR1或權利要求2或3所述的菌絲體或含菌絲體的培養液中的特羅格栓菌(Trametes trogii)菌株TR1。

5.根據權利要求4所述的真菌多糖，其特征在于，所述真菌多糖為特羅格栓菌菌絲體多糖，分子量為20000-80000Da。

6.根據權利要求4或5所述的真菌多糖，其特征在于，所述真菌多糖包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖。

7.根據權利要求4-6任一項所述的真菌多糖，其特征在于，還包括艾杜糖、肌糖、核糖和山梨糖。

8.一種權利要求4-7任一項所述真菌多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將權利要求1所述的特羅格栓菌菌株TR1進行發酵，將所得的發酵液制成菌絲體干粉；

(2)菌絲體的酶解：將菌絲體干粉加水制成混懸液，加入占干粉質量0.8％-1.2％的復合酶進行酶解制成酶解液；

(3)特羅格栓菌菌絲體多糖提取步驟：將酶解液在90-110kPa壓力和110-120℃熱水浸提60-120min，離心取上清，濾渣重復浸提1-3次，取上清合并，60-70℃減壓濃縮至原體積的20-30％，純化。

9.根據權利要求8所述的真菌多糖的制備方法，其特征在于，所述復合酶包括纖維素酶、木瓜蛋白酶和果膠酶中的至少兩種，酶解溫度為45-55℃，酶解時間為3-5h。

10.根據權利按要求8-9任一項所述的真菌多糖的制備方法，其特征在于，所述特羅格栓菌菌絲體多糖提取步驟，減壓濃縮后的體積為濃縮前體積的20％-30％。

11.根據權利按要求8-10任一項所述的真菌多糖的制備方法，其特征在于，所述純化步驟包括除蛋白和醇沉；

所述除蛋白包括：采用Sevage法除蛋白3-5次；

所述醇沉包括：加入乙醇至乙醇的體積分數為70％，4℃靜置，保留沉淀，冷凍干燥得到TGM干粉。