[發明專利]一種特異性納米抗體Nb2F7及其應用

有效

• 申請號: 202010108408.6
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111269319B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 王弘;楊媛媛;沈玉棟;張詠儀;陳浩宇;徐振林;肖治理;孫遠明
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/53
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明公開了一種特異性納米抗體Nb2F7及其應用。本發明提供了一種特異性納米抗體Nb2F7，所述納米抗體Nb2F7的VHH的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。該納米抗體Nb2F7能夠特異性識別19?NT，且具有優異的有機溶劑耐受性，不會受到在實際樣品檢測前處理過程中加入的有機溶劑的影響，檢測結果準確度高，對19?NT的檢測范圍為0.34ng/mL～8.32ng/mL，IC50為1.14ng/mL，最低檢測限為0.16ng/mL，檢測靈敏度高，且操作簡單、所耗時間較短；另外，該納米抗體Nb2F7的制備方法簡單，具有普遍適用性；因此，該納米抗體Nb2F7在檢測19?去甲睪酮、制備19?去甲睪酮檢測試劑/試劑盒中具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域。更具體地，涉及一種特異性納米抗體Nb2F7及其應用。

背景技術

19-去甲睪酮(19-nortestosterone，19-NT)簡稱諾龍，是睪酮甾環結構上脫去第19位碳原子而形成的內源性和外源性蛋白同化激素，其具有很強的促蛋白質合成能力，能參與生長發育的生理調節，促進骨骼和肌肉的生長，減少脂肪貯積。因此，許多國家和地區將19-NT用作畜禽生長促進劑，以改善生產性能，提高飼料報酬。臨床主要用于治療貧血老年性骨質疏松，還能促進人體肌肉的生長發育，增加訓練耐力和訓練負荷，運動員服用19-NT后，能增強肌肉力量，結合適度的鍛煉和飲食，可提高比賽成績。

但研究表明，19-NT及其代謝物殘留可影響人的肝臟功能，損害心血管系統，還可造成生殖器官受損、腎上腺萎縮、情緒失控及內分泌失調等毒副作用。這就要求對食源性動物生產進行嚴格的激素濫用監測，以保護消費者的身心健康。因此，亟需一種快速、靈敏、高效的檢測方法來實現對19-NT的快速檢測。

現有常見的檢測19-NT的方法有：薄層色譜法、氣相色譜法(簡稱GC)、高效液相色譜法(簡稱HPLC)、氣相色譜-質譜法、液相色譜質譜聯用法以及其他定量檢測方法。但這些方法需要專業的技術人員、繁瑣的樣品前處理過程和昂貴的儀器設備，不適合大批量市場檢測和現場監控。而免疫學檢測技術靈敏度高、特異性強、操作簡單、價格低廉，能夠實現對生物液體的小體積、大通量檢測，逐漸成為有毒有害殘留物檢測的替代方法。

目前，19-NT殘留分析一般使用氣相色譜法、高效液相色譜法及色譜質譜聯用技術，這些方法靈敏、準確，但樣品前處理復雜、繁瑣費時，且需要昂貴的儀器設備和專業的操作人員，檢測成本高，難以滿足樣品現場、批量、快速檢測的需要。因此，開發一種簡單快速、適用于獸藥殘留現場監控的分析方法具有重要意義。而基于抗體(單克隆抗體和多克隆抗體)建立的免疫分析方法，雖然具有快速、靈敏、高通量的優勢，但是在極端條件下抗體往往穩定性差，容易失活，且在實際樣品檢測前，對樣品的前處理過程需要用到有機溶劑，而有機溶劑的殘留使得以單克隆抗體和多克隆抗體為主的免疫學檢測的靈敏度、準確度大大降低。因此，研發一種穩定性好、準確度高、靈敏度強的快速檢測19-NT的方法，具有重要意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是為了克服上述現有技術的不足，提供一種19-NT特異性納米抗體Nb2F7及其應用。

本發明的目的是提供一種特異性納米抗體Nb2F7。

本發明另一目的是提供一種編碼所述納米抗體Nb2F7的基因。

本發明又一目的是提供一種特異性納米抗體Nb2F7表達載體。

本發明又一目的是提供一種重組細胞。

本發明又一目的是提供所述納米抗體Nb2F7、所述基因、所述表達載體或所述重組細胞在檢測19-去甲睪酮中的應用。

本發明又一目的是提供所述納米抗體Nb2F7、所述基因、所述表達載體或所述重組細胞在制備19-去甲睪酮檢測試劑/試劑盒中的應用。

本發明再一目的是提供一種檢測19-去甲睪酮的方法。