[發(fā)明專(zhuān)利]一種膀胱癌基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法、探針及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010108375.5
• 申請(qǐng)日: 2020-02-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111269983A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳松;歐銅;蔣文祺;徐銀燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 深圳市眾循精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6886;C12Q1/6841;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市君勝知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44268
• 代理人: 劉芙蓉

本發(fā)明公開(kāi)一種膀胱癌基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法、探針及試劑盒，用于檢測(cè)膀胱癌相關(guān)FRS2基因(NCBI Gene ID:10818)擴(kuò)增的一組雙色FISH探針為(1)標(biāo)記為紅色的FRS2基因探針，(2)標(biāo)記為綠色的12號(hào)染色體中心粒探針。本發(fā)明的膀胱癌相關(guān)FRS2基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法通過(guò)對(duì)尿脫落細(xì)胞及膀胱癌組織石蠟切片進(jìn)行常規(guī)預(yù)處理后，采用一組雙色FISH探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷膀胱癌相關(guān)FRS2基因的擴(kuò)增情況。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、特異性和敏感性高，可以快速、直觀地檢測(cè)出膀胱癌相關(guān)FRS2基因的擴(kuò)增狀態(tài)，準(zhǔn)確可靠，從而輔助膀胱癌患者進(jìn)行尿液早期無(wú)創(chuàng)診斷及術(shù)后復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)及檢測(cè)等方面臨床應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種膀胱癌基因擴(kuò)增的FISH 檢測(cè)方法、探針及試劑盒。

背景技術(shù)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)惡性腫瘤。目前，臨床上膀胱癌診斷方法涉及膀胱鏡檢查、尿常規(guī)檢查、尿脫落細(xì)胞學(xué)分析、尿腫瘤標(biāo)記物檢查、腹部和盆腔B超等。尿膀胱癌標(biāo)志物的研究為無(wú)創(chuàng)診斷膀胱癌提供了多種檢測(cè)指標(biāo)，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)將BTAstat、NMP22、尿熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)等用于膀胱癌的輔助診斷。已有研究顯示FISH技術(shù)具有較高的敏感性和特異性。目前，臨床上主要通過(guò)FISH檢測(cè)3、7、17號(hào)染色體非整倍體以及p16基因擴(kuò)增情況輔助診斷膀胱癌。隨著腫瘤基因組學(xué)研究的深入，一系列基于FISH技術(shù)開(kāi)發(fā)的基因檢測(cè)方法在腫瘤診斷與治療領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。最新的膀胱癌組學(xué)研究揭示膀胱癌中FRS2(成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體底物2)基因存在特異性拷貝數(shù)擴(kuò)增，且突變頻率高。因此，通過(guò)FISH方法檢測(cè)FRS2擴(kuò)增情況可作為輔助診斷膀胱癌的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

FRS2是一種銜接蛋白，能與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān)的多種受體結(jié)合，介導(dǎo)其下游信號(hào)通路的激活過(guò)程，從而發(fā)揮重要生物學(xué)功能。經(jīng)研究揭示FRS2 拷貝數(shù)擴(kuò)增導(dǎo)致其編碼蛋白在腫瘤組織中高表達(dá)，且關(guān)聯(lián)不良預(yù)后。因此通過(guò)FISH檢測(cè)FRS2擴(kuò)增情況可作為膀胱癌病理學(xué)診斷的重要靶分子。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述檢測(cè)FRS2擴(kuò)增在膀胱癌診療中的重要意義及其目前尚缺乏操作簡(jiǎn)便、結(jié)果穩(wěn)定直觀的檢測(cè)方法，本發(fā)明的目的在于提供一種基于FISH 技術(shù)的FRS2基因擴(kuò)增檢測(cè)方法，用于尿液無(wú)創(chuàng)診斷膀胱癌及膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

用于檢測(cè)膀胱癌相關(guān)FRS2基因擴(kuò)增的一組雙色FISH探針，其中，所述一組雙色FISH探針為(1)標(biāo)記為紅色的FRS2基因探針，(2)標(biāo)記為綠色的12號(hào)染色體中心粒探針。其中FRS2：NCBI Gene ID:10818；序列參考：NC_000012.12；網(wǎng)址：https://www.ncbi.nlm.nih.gov。進(jìn)一步地，利用切口平移法制作所述標(biāo)記為紅色的FRS2基因探針，利用PCR法制作所述標(biāo)記為綠色的12號(hào)染色體中心粒探針。

一種用于檢測(cè)膀胱癌相關(guān)FRS2基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)試劑盒，其中，所述FISH檢測(cè)試劑盒包括一組雙色FISH探針，所述一組雙色FISH探針為 (1)標(biāo)記為紅色的FRS2基因探針，(2)標(biāo)記為綠色的12號(hào)染色體中心粒探針。

一種膀胱癌相關(guān)FRS2基因擴(kuò)增的FISH檢測(cè)方法，其中，所述FISH檢測(cè)方法包括：對(duì)尿脫落細(xì)胞及膀胱癌組織石蠟切片進(jìn)行預(yù)處理后，采用一組雙色FISH探針進(jìn)行原位雜交，根據(jù)檢測(cè)到的熒光信號(hào)判斷是否存在膀胱癌相關(guān)FRS2基因的擴(kuò)增；其中所述一組雙色FISH探針為(1)標(biāo)記為紅色的FRS2基因探針，(2)標(biāo)記為綠色的12號(hào)染色體中心粒探針。