[發明專利]一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體、制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202010108188.7
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111304208B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 李玉娟;梁敏;武廣霞;郭晶晶;鄧玉林
• 申請（專利權）人: 北京理工大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/10;G01N33/53
• 代理公司: 北京理工大學專利中心 11120
• 代理人: 張潔

本發明涉及一種特異性結合P?糖蛋白的核酸適配體、制備方法及其應用，屬于生物技術領域。所述核酸適配體的核苷酸序列選自序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.14；是通過SELEX技術結合表面修飾的磁珠對原始隨機寡核苷酸文庫進行篩選、擴增、測序制備得到；所述核酸適配體分子量小，可以化學合成，成本低；親和性和特異性強；便于標記；重復性和穩定性好，易于保存。可制作成熒光分子探針，實現生物體外組織、細胞上P?gp的熒光可視化以及量化；可以特異性的結合P?gp，抑制P?gp的功能，成為P?gp功能的潛在核酸型抑制劑。

技術領域

本發明涉及一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體、制備方法及其應用，屬于核酸適配體技術領域。

背景技術

P-糖蛋白(P-gp)是由mdr 1基因編碼的一種藥物外排蛋白，在體內廣泛分布于腦內毛細血管內皮細胞，腸道柱狀上皮細胞，肝細胞面向膽小管的腔膜面等，與底物結合后將其從細胞漿中排出細胞，對藥物在體內吸收、分布、代謝、排泄有重要的作用，它的底物廣泛，其中包括黃酮類、查耳酮類、生物堿類、皂苷類等天然產物。研究表明P-gp的外排功能與腫瘤細胞的多藥耐藥性有關，尋找P-gp低毒、高效抑制劑成為抗腫瘤的有效策略之一。目前P-gp的經典抑制劑如維拉帕米、LY33597等，因其活性低、特異性差、細胞毒性高等缺陷，尚未廣泛應用。

核酸適配體是利用指數富集的配體系統進化(SELEX)技術篩選得到的能特異結合靶物質的寡核苷酸片段。SELEX技術是上世紀90年代由Tuerk和Ellington等人發明的一種新的組合化學技術。它利用分子生物學技術，構建人工合成的隨機寡核苷酸文庫，其中隨機序列長度一般在20～40nt左右，兩端引物序列一般在20nt左右，文庫容量大約在10¹⁴～10¹⁵范圍內。由于單鏈寡核苷酸隨機序列，尤其是RNA序列容易形成凸環、發卡、假節、G-四聚體等二級結構，故能與蛋白質、肽段、藥物、氨基酸、有機化合物、甚至是金屬離子相結合，形成具有很強結合力的復合體。SELEX技術具有經濟、簡便、快速等特點。與其他組合化學庫如隨機肽庫、抗體庫、噬菌體表面展示文庫相比，從寡核苷酸隨機文庫中篩選出的核酸適配體具有很多優勢：(1)寡核苷酸本身分子量較小，易于合成，便于后續試驗；(2)某些核酸適配體具有強于抗體的親和性和特異性，無免疫原性；(3)核苷酸的化學結構和性質提供了易于標記的特性；(4)穩定性好，半衰期短，易于保存和運輸，對高溫和劇烈環境不敏感。(5)核酸適配體較于抗體易合成。因此，寡核苷酸核酸適配體在生物熒光可視化領域具有良好的應用前景，可以克服傳統抗體在血液存在時間長，產生較高背景信號從而影響可視化效果的缺陷，可實現生物體外的組織、細胞水平上生物過程的可見、描述及定量。

目前，與P-gp具有高特異性和高親和力的核酸適配體尚無相關報道。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體、制備方法及其應用。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體，所述核酸適配體的核苷酸系列選自核苷酸序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.14的一種。

一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體，所述核酸適配體是與所述核苷酸序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.14中的一種序列一致性為60％以上，并且具有相同功能的核苷酸序列。

一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體，所述核酸適配體是與所述核苷酸序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.14的一種序列雜交，并且具有相同功能的寡核苷酸序列。

一種特異性結合P-糖蛋白的核酸適配體，所述核酸適配體是與所述核苷酸序列表中SEQ ID No.1～SEQ ID No.14的一種序列轉錄的RNA序列。