[發明專利]一種重組蛋白swHO1的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010107683.6
• 申請日: 2020-02-21
• 公開（公告）號: CN111304177B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 李偉;孫文秀;臧彧偉
• 申請（專利權）人: 長江大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N15/66
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 易賢衛

本發明公開了一種重組蛋白swHO1的制備方法，提取黃鱔肝臟組織總RNA，通過反轉錄和PCR擴增，將黃鱔血紅素氧化酶1的編碼基因克隆到表達載體上，獲得重組表達載體pET?HO1；將所述重組表達載體pET?HO1轉化到大腸桿菌BL21(DE3)細胞中進行表達，純化，得到重組蛋白swHO1。一種重組蛋白swHO1在病原細菌誘導的黃鱔氧化應激調控中的應用、及黃鱔免疫相關基因表達調控中的應用。本發明構建了黃鱔血紅素氧化酶1基因的原核表達載體，誘導表達，親和層析獲得純化的重組蛋白swHO1。本發明制備的黃鱔血紅素氧化酶1具有提高病原細菌處理的血清組織中抗氧化能力和提高肝臟免疫相關基因表達的作用。

技術領域

本發明屬于重組基因蛋白技術領域，具體涉及一種重組蛋白swHO1的制備方法及應用。

背景技術

血紅素氧化酶是生物體內血紅素降解過程中的重要限速酶，它可以將血紅素降解為一氧化碳(CO)、膽綠素和Fe²⁺。這三種產物在機體內具有抗氧化、抗炎癥和促進細胞自噬及調控細胞凋亡與增殖的作用。目前已知，哺乳動物血紅素氧化酶有1、2和3三種主要的同工酶。黃鱔(Monopterus albus)的HO1基因是否在病原細菌誘導的氧化應激中能夠起到的調控作用和對免疫相關基因表達有什么的影響，未見相關報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種重組蛋白swHO1的制備方法，并且所制備的重組蛋白swHO1能夠降低病原細菌感染誘導的氧化應激水平、提高抗氧化能力并能顯著提高免疫相關基因的表達。其技術方案如下：

一種重組蛋白swHO1的制備方法，提取黃鱔肝臟組織總RNA，通過反轉錄和PCR擴增，將黃鱔血紅素氧化酶1的編碼基因克隆到表達載體上，獲得重組表達載體pET-HO1；將所述重組表達載體pET-HO1轉化到宿主細胞中進行表達，純化，得到重組蛋白swHO1。

一種所述方法制備得到的重組蛋白swHO1。

一種重組蛋白swHO1在病原細菌誘導的黃鱔氧化應激調控中的應用。

一種重組蛋白swHO1在病原細菌誘導的黃鱔免疫相關基因表達調控中的應用。

本發明提供的技術方案至少包括以下有益效果：

1、本發明采用基因工程的方法，構建了黃鱔血紅素氧化酶1基因的原核表達載體，誘導表達，親和層析獲得純化的重組蛋白swHO1。

2、本發明制備的重組蛋白swHO1，一定程度上抑制了血清中ROS的水平，并提高血清總抗氧化能力。

3、本發明制備的重組蛋白swHO1具有調控肝臟免疫相關基因表達的作用。重組蛋白swHO1能夠一定程度上激活內源性HO1基因的表達，能夠抑制Nrf2-keap1-ARE信號途徑，從而起到平衡ROS產生的氧化應激，起到保護機體細胞的作用。另外，重組蛋白swHO1可以顯著提高急性應激期肝臟中Hepcidin基因的表達。

本發明的其它優點、目標和特征將部分通過下面的說明體現，部分還將通過對本發明的研究和實踐而為本領域的技術人員所理解。

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的黃鱔HO1基因表達和純化后的SDS-PAGE圖，其中，最左側泳道為Marker；泳道1為陰性對照(含pET-28a(+)質粒菌株誘導后)；泳道2為陽性對照(含pET-HO1質粒菌株未誘導)；泳道3為含pET-HO1質粒菌株誘導后；泳道4為純化的重組蛋白swHO1；

圖2為本發明實施例提供的黃鱔重組蛋白swHO1對病原菌處理的血清ROS水平的影響圖；

圖3為本發明實施例提供的黃鱔重組蛋白swHO1對病原菌處理的血清T-AOC水平的影響圖；

圖4為本發明實施例提供的黃鱔重組蛋白swHO1對病原菌處理的肝臟HO1基因表達的影響圖；